ТОШКЕНТ ТИББИЁТ АКАДЕМИЯСИ
ҲУЗУРИДАГИИЛМИЙ ДАРАЖАЛАР БЕРУВЧИ
DSc.27.06.2017.Tib.30.03 РАҚАМЛИ ИЛМИЙ КЕНГАШ
ГЕМАТОЛОГИЯ ВА ҚОН ҚУЙИШ ИЛМИЙ-ТАДҚИҚОТ
ИНСТИТУТИ
КАСЫМОВА ГУЛЬМИРА ГАФУРОВНА
ГЕПАТОКАНЦЕРОГЕНЕЗ ВА ГЕМОБЛАСТОЗЛАРНИ ҚИЁСИЙ
ЎРГАНИШ: ПАТОГЕНЕЗ ВА РЕКОМБИНАНТ ИНТЕРЛЕЙКИН-2
БИЛАН ЭКСПЕРИМЕНТАЛ ДАВОЛАШ
14.00.16 – Нормал ва патологик физиология
ТИББИЁТ ФАНЛАРИ БЎЙИЧА
ДОКТОРЛИК (DSc) ДИССЕРТАЦИЯСИ АВТОРЕФЕРАТИ
Тошкент
–
2017
1
УДК:
616.1+1-616.15+615.38+61:577.1+616-074
Докторлик (DSc) диссертацияси автореферати мундарижаси
Оглавление автореферата докторской (DSc) диссертации
Content of the Doctoral(DSc) Dissertation Abstract
Касымова Гульмира Гафуровна
Гепатоканцерогенез ва гемобластозларни қиѐсий
ўрганиш: патогенез ва рекомбинант интерлейкин-2
билан экспериментал даволаш ................................................................... 3
Касымова Гульмира Гафуровна
Сравнительное изучение гепатоканцерогенеза и
гемобластозов: патогенез и экспериментальная
терапия рекомбинантным интерлейкином - 2
…………........………….…….
25
Kasimova Gulmira Gafurovna
Comparative study of hepatocarcinogenesis and
hemoblastosis: pathogenesis and experimental therapy
recombinant interleukin-2............................................................................... 47
Эълон қилинган ишлар рўйхати
Список опубликованных работ
List of published works …………………………………………………….. 52
2
ТОШКЕНТ ТИББИЁТ АКАДЕМИЯСИ
ҲУЗУРИДАГИ ИЛМИЙ ДАРАЖАЛАР БЕРУВЧИ
DSc.27.06.2017.Tib.30.03 РАҚАМЛИ ИЛМИЙ КЕНГАШ
ГЕМАТОЛОГИЯ ВА ҚОН ҚУЙИШ ИЛМИЙ-ТАДҚИҚОТ
ИНСТИТУТИ
КАСЫМОВА ГУЛЬМИРА ГАФУРОВНА
ГЕПАТОКАНЦЕРОГЕНЕЗ ВА ГЕМОБЛАСТОЗЛАРНИ ҚИЁСИЙ
ЎРГАНИШ: ПАТОГЕНЕЗ ВА РЕКОМБИНАНТ ИНТЕРЛЕЙКИН-2
БИЛАН ЭКСПЕРИМЕНТАЛ ДАВОЛАШ
14.00.16 – Нормал ва патологик физиология
ТИББИЁТ ФАНЛАРИ БЎЙИЧА
ДОКТОРЛИК (DSc) ДИССЕРТАЦИЯСИ АВТОРЕФЕРАТИ
Тошкент
–
2017
3
Докторлик (DSc) диссертацияси мавзуси Ўзбекистон Республикаси Вазирлар
Маҳкамаси ҳузуридаги Олий аттестация комиссиясида В2017.1.DSc/Tib9 рақам
билан рўйхатга олинган.
Диссертация Гематология ва қон қуйиш илмий-тадқиқот институтида бажарилган.
Диссертация автореферати икки тилда (ўзбек, рус) веб-саҳифада www.tma.uz ва
«ZiyoNet» ахборот-таълим портали (www.ziyonet.uz) манзилларига жойлаштирилган.
Илмий маслаҳатчи: Каримов Хамид Якубович
тиббиѐт фанлари доктори, профессор
Расмий оппонентлар: Сабирова Рихси Абдукадировна
тиббиѐт фанлари доктори, профессор
Зокиров Ёркин Узуевич
тиббиѐт фанлари доктори, профессор
Пулатов Дониёр Анварович
тиббиѐт фанлари доктори, профессор
Етакчи ташкилот:
ФДАОТТМ И.М.Сеченов номидаги Биринчи Москва давлат
тиббиѐт университети (Сеченов Университети)
(Россия Федерацияси)
Диссертация
ҳимояси
Тошкент
тиббиѐт
академияси
ҳузуридаги
DSc.27.06.2017.Tib.30.03 рақамли Илмий кенгашнинг 2017 йил «____»____________ соат
____даги мажлисида бўлиб ўтади (Манзил: 100109, Тошкент, Фаробий кўчаси, 2.
Тел./факс: (99871) 150-78-25, e-mail: tta2005@mai.ru). Тошкент тиббиѐт академияси, 1-ўқув
биносининг мажлислар зали).
Докторлик (DSc) диссертация билан Тошкент тиббиѐт академияси Ахборот-ресурс
марказида танишиш мумкин (_____ рақами билан рўйхатга олинган). Манзил: 100109,
Тошкент ш., Фаробий кўчаси 2-уй. Тошкент тиббиѐт академияси 2-ўқув бино «Б» корпуси,
1-қават, 7-хона. Тел./факс: (99871)- 150-78-14.
Диссертация автореферати 2017 йил «_____»______________ да тарқатилди.
(2017 йил«____»______________ даги ______ рақамли реестр баѐнномаси).
Г. И. Шайхова
Илмий даражалар берувчи
илмий кенгаш раиси,
т.ф.д., профессор
Н. Ж. Эрматов
Илмий даражалар берувчи илмий
кенгаш илмий котиби, т.ф.д., доцент
Б.У. Ирисқулов
Илмий даражасини берувчи илмий
кенгаш қошидаги илмий семинар
раиси, т.ф.д., профессор
4
КИРИШ (докторлик диссертацияси аннотацияси)
Диссертация мавзусиниинг долзарблиги ва зарурати.
Ўсма касал
ликларининг ривожланишига дунѐ аҳолиси орасида тамаки маҳсулотларини
сурункали истеъмол қилиш, тамаки чанги, турли кимѐвий овқат
қўшимчалари, консервантлар, стресс, рентген нурлари, пестицидлар, ион
нурланишлар ҳамда ташқи муҳит салбий омилларининг таъсири бўлиб, унинг
улуши 85%ни ташкил қилади. «Жаҳонда йилига 6 млндан ортиқ киши
ўсмалардан, 1 млндан ортиғи эса гепатоцеллюляр ўсмалардан вафот этади,
лейкозлар эса ҳар 100.000 аҳоли 13,2 ҳодисани ташкил қилиб, уларнинг 60%
ишлаш қобилиятини йўқотган ва ногиронларга тўғри келади»
1
.
Ўзбекистон Республикасида мустақиллик йилларида аҳолига кўрсати
лаѐтган тиббий хизмат тизими тубдан ўзгартирилди, шу ўринда аҳолининг
орасида ўсма касалликларини тарқалишини камайтириш, касалликни
ташхислаш, даволашнинг замонавий тиббий воситалари ва самарали
усулларни амалиѐтга татбиқ этилмоқда. Бунинг оқибатида ўсмаларни
кимѐвий дори воситалари билан даволашда уларнинг зарарли оқибатларни
камайтиришга қаратилган кенг қамровли чора-тадбирларни амалга ошириш,
касалликни эрта аниқлаш ва самарали даволаш натижасида «ўсма
касалликлари билан хасталанган беморларнинг умр кўриш давомийлиги 3-5
йилга узайтирилди
2
.
Жаҳонда хавфли ўсма касалликлари билан хасталанган беморларни
ташхислаш ва самарли даволаш, унинг олдини олишга қаратилган
профилактик тадбирларни юқори самарадорлигига эришиш мақсадида қатор
илмий тадқиқотлар амалга оширилмоқда, жумладан, ўсма ҳужайраларининг
жавоб механизмлари пролиферация, апоптоз, функционал фаоллигининг
ўзгаришига ташқи муҳит омилларининг таъсир механизмини аниқлаш;
хавфли ўсмалар молекуляр механизмларининг умумий ва специфик
хусусиятларини мукаммал ўрганиш асосларини яратиш; ўсмалар ривожланиш
даражасини баҳолашда пролефератив ва антиоксидант тизим ферментлари
фаоллигини объектив баҳолаш мезонини ишлаб чиқиш; ўсмалар оқибатида
ўлим кўрсаткичи белгиловчи омилларни асослаш; ўсмаларни консерватив
даволаш усулларини такомиллаштириш; ўсмаларни даволашда кенг қамровли
иммункорректорларни комплекс даволаш тизимига киритиш; даволаш
тактикасини оптималлаштириш, онкологик касалларни кимѐвий дори
воситалари билан даволаш тизими асоратларини камайтириш ва
самарадорлигини ошириш жараѐнини татбиқ қилиш муҳим аҳамият касб
этади.
Ўзбекистон Республикаси Президентининг 2011 йил 28 ноябрдаги ПҚ
1652-сон «Соғлиқни сақлаш тизимини ислоҳ қилишни янада чуқурлаштириш
чора-тадбирлари тўғрисида»ги Қарори ҳамда мазкур фаолиятга тегишли
1
ЖССТ Европа регионида асосий саломатлик кўрсаткичлари. ЖССТ, 2014 йил.
2
Соғлиқни сақлаш вазирлигининг хисоботлари
5
бошқа меъѐрий-ҳуқуқий ҳужжатларда белгиланган вазифаларни амалга
оширишда мазкур диссертация тадқиқоти муайян даражада хизмат қилади.
Тадқиқотнинг республика фан ва технологиялари ривожланиши нинг
устувор йўналишларига боғлиқлиги.
Мазкур тадқиқот республика фан ва
технологиялар ривожланишининг VI. «Тиббиѐт ва фармакология» устувор
йўналиши доирасида бажарилган.
Диссертация мавзуси бўйича халқаро илмий-тадқиқотлар шарҳи
3
.
Ўсмаларнинг ривожланишида молекуляр механизмини ўрганиш ва
консерватив даволаш, касалликни олдини олишга йўналтирилган илмий
изланишлар жаҳоннинг етакчи илмий марказлари ва олий таълим
муассасаларида, жумладан University of Oklahoma, Boston University, National
Cancer Institute (АҚШ); Universitat Autonoma de Barcelona (Испания), Osaka
University; Hokkaido University (Япония); Department of Immunology and
Chronic Disease Research Center and Institute for Medical Science, Occupational
Safety and Health Research Institute (Корея), Korea Occupational Safety and
Health agency, Division of Hematology-Oncology, EwhaWomans University
(Корея); Россия Онкология илмий маркази, гематология институти, (Россия)
ва Гематология ва қон қуйиш институти ва Республика онкология илмий
тадқиқот марказида (Ўзбекистон) олиб борилмоқда.
Ўсма касалликларнинг эрта ташхислаш ва олдини олиш бўйича амалга
оширилган тадқиқотлар натижасида қатор, жумладан қуйидаги илмий
натижалар олинган: бензол ва бошқа органик кислоталар таъсирида лейкемия
ва миеломалар ривожланиши исботланган (Occupational Safety and Health
Research
Institute
(Корея);
гемабластозлар
ривожланишида
Y
хромосомларнинг молекуляр бузилишининг аҳамияти исботланган
(University of Oklahoma Health Sciences Center (АҚШ); ўсмаларни даволашда
биопрепаратларнинг таъсир механизми асосланган (Osaka University
(Япония); миелопролеферацияни даволашда қўлланиладиган дори
воситаларининг гепато, сплено ва нефротоксик таъсири аниқланган
(Universitat Autonoma de Barcelona (Испания); Division of Hematology
Oncology, Ewha Womans University, (Корея); ўсма касалликлари тарқалиш
эпидемиологияси ҳамда ташхислашнинг замонавий алгоритмлари ишлаб
чиқилган (University of Oklahoma Health Sciences Center, Boston University,
National Cancer Institute (АҚШ); ўсмаларни даволашда трансретиноид
кислоталарининг самарадорлиги исботланган (Gifu University; Kinki
University (Япония); ўсма касалликларни ривожланишининг молекуляр
генетик механизмлари ҳамда касалликни даволашда дори воситаларини
ишлаб чиқариш ва қўллаш механизми яратилган (Онкология илмий маркази,
Россия); гепатоканцерогенез ва гемобластозларни интерлейкин-2 билан
3
Диссертация мавзуси бўйича хорижий илмий-тадқиқотлар шарҳи:https://www.ou.edu/, http:/ /www.bu.edu/,
https://www.cancer.gov/,http://www.uab.cat/web/universitat-autonoma-de-barcelona.html,http://-www.osaka
u.ac.jp/en,https://www.oia.hokudai.ac.jp/,http://www.aseic.org/expert,https://www.ewha.ac.kr/mbs-/ewhaen/, http:
//www.bloodscience.ru/,http://qonber.uz/pages/pages_uz/news.html,http://www.ouhsc.edu/,https:// www.bumc.
bu.edu/busm/cancer-center/, http://www.gifu-u.ac.jp/en/,http://www.kindai.ac.jp/english/ ва бошқа манбалари
асосида амалга оширилди.
6
экспериментал даволаш механизми модели ишлаб чиқилган (Гематология ва
қон қуйиш илмий-тадқиқот институти, Ўзбекистон).
Дунѐда ўсма касалликларининг тарқалишини олдини олиши ва уларнинг
молекуляр механизмларни асослаш бўйича қатор устувор йўналишларда
тадқиқотлар олиб борилмоқда, жумладан, кимѐвий бирикмаларнинг канцеро
генлик хавфини асослаш; ўсмалар ўсишининг молекуляр генетикаси,
ўсмаларнинг микромуҳитини ўзгариш механизмини ишлаб чиқиш; иммун
механизмининг ўрни; неоплазия жараѐнида азот оксиди тизими; резистент
ўсма ҳужайраларининг ўсишида ва кимѐтерапиянинг заҳарлиги ҳамда
гепатоцеллюляр саратон ва онкогематологик касаллик билан оғриган
беморларнинг ташхислаш ҳамда даволаш усулларини янада такомиллаш
тириш.
Муаммонинг ўрганилганлик даражаси
. Кейинги йилларда узоқ
(Dougan M., Dranoff G., 2009; Cai L.L. et al., 2012; Pere H. et al., 2012) ва яқин
хорижий давлатларда (Харченко Е. П., 2011; Чечина О. Е. ва бошқ., 2011;
Савина Н. П., 2013) ўтказилган тадқиқотларда айтилишча, ген мутациясида
ўсма ҳужайрасида апоптозанинг бузилиш механизмларидан бири бу
жараѐнни назорат қилади; ўсма некроз омили ген оиласидаги қисмларининг
ўзгариши (ФНО-α); капсаз; цитотоксик Т-лимфоцит ва табиий киллер (ТК).
Буни олдини олиш учун ўсма ҳужайралари жараѐнини фаоллаштириш,
ундаги апоптозни ўраб олишни тўхтатиш, шунингдек, улардаги ўсиш
жараѐнини фаоллаштириш зарур (Рязанцева Н. В. и др., 2012; Леенман Е. Е.,
Мухина М. С., 2013; Fredly H., Ersver E., Gjertsen B. T., Bruserud O., 2011). Бу
жараѐнларда азот оксиди муҳим ўрин тутади. Х. Маеда (1998) фикрича,
кўплаб қаттиқ ўсма тўқималарида индуцибел формаси NО-синтез (iNOS).
Ўзбекистонда ушбу йўналишда бир қатор илмий тадқиқотлар амалга
оширилган. Х.Я. Каримов канцерогенез механизми, Д.А. Пўлатов
гепатоцеллюляр саратон; Ф.Х. Иноятова NO-эргик тизими ва липид
оксидланишини бузилиши, М.Т.Мухаммедова–гепатоканцерогенезда азот
оксидининг ўрни бўйича тадқиқотлар олиб боришган.
Онкологияда кимѐтерапия жараѐни беморнинг ҳаѐт сифатини яхшилаш
имконини беради. Бироқ ҳатто энг сўнгги кимѐтерапия дори воситалари
тананинг тез кўпаядиган тўқималари устидан токсик таъсири бор. Бу
омиллар цитотоксик дориларни клиник фойдаланиш имконини чеклайди ва
доимий равишда ўсма касалликларини даволашда янги усулларни излашга
мажбур этади. Бу борада иммунотоксинлар, цитокинлар, моноклонал
антителалар мавжуд. 1998 йилда Россия онкология илмий маркази ва
«Биотех» компанияси ИЛ-2 дан хамиртуруш дори – ронколейкин, фаол
апоптоз, апоптозга қарши факторлар ингибирлашган ангиогенез олган.
Неопластик жараѐнларни ривожлантириш, унинг турли орган ва
тизимларга шикаст етказишини умумий ва ўзига хос хусусиятларини
шакллантириш фундаментал тиббиѐтнинг энг асосий муаммоларидан бири
эканлигини кўрсатади. Бу касалликлар кимѐтерапия самарадорлигини
ошириш учун чуқур ўрганиш зарурлигини тақозо этади.
7
Тадқиқотнинг
диссертация
бажарилган
илмий-тадқиқот
муассасасининг илмий-тадқиқот ишлари режалари билан боғлиқлиги.
Диссертация тадқиқоти Гематология ва қон қуйиш илмий–тадқиқот
институтининг «Гемобластозларнинг сурункали шаклларни клиник кечишида
вирусларга қарши жавоб таъсирида айрим герпес вирусларининг ўрни ва
ахамиятини таҳлили» (2012–2016 йй.) мавзусидаги фундаментал лойиҳа
режасига мувофиқ бажарилган.
Тадқиқотнинг мақсади
гепатоканцерогенез ва лейкемияда неопластик
жараѐн ривожига хос молекуляр механизмларини аниқлаш ва даволашнинг
самарали усулларини ишлаб чиқишдан иборат.
Тадқиқотнинг вазифалари:
гепатоканцерогенез ва лейкемия даврида азот оксиди (НАДФ, Н
диафораз ва нитрат натрий миқдори) ишлаб чиқариш ўзгариши хусусият
ларини аниқлаш;
гепатоканцерогенез ва лейкемияда қондаги липидлар оксидланиши
ҳамда антиоксидант ҳимоя ферментлари фаоллигининг бузилиши жараѐнини
аниқлаш;
гепатоканцерогенез ва лейкемия даврида интерлейкин даражасининг
ўзгариш хусусиятларини аниқлаш;
гепатоканцерогенез ва лейкемия комплекс фармакотерапиясида ронко
лейкин қўлланилишининг морфологик самарадорлигини баҳолаш;
гепатоканцерогенез ва лейкемияда биокимѐвий ҳамда иммунологик
кўрсаткичларнинг бузилишини олдини олиш мақсадида ронколейкин ва
цитостактикларни биргаликда қўллаш самарадорлигини баҳолаш.
Тадқиқотнинг объекти
сифатида 400 та катта эркак каламушлар олинди:
180 та – диэтилнитрозолин (ДЭНА) индуцирланган гепатоканцерогенезли;
180 та – бензол орқали лейкемия чақирилган; 40 – та интакт ҳайвонлар
олинган.
Тадқиқотнинг предмети
тажриба ҳайвонларнинг қонидаги зардоб, қон,
суяк илиги ҳужайралари, жигар тўқимасини комплекс таҳлил материаллари
олинган.
Тадқиқотнинг усуллари.
Тадқиқот вазифаларни бажаришда морфо
логик, цитокимѐвий, цитологик, иммунофермент, биокимѐвий ва статистик
таҳлил усулларидан фойдаланилган.
Тадқиқотнинг илмий янгилиги
қуйидагилардан иборат:
илк бор гепатоканцерогенез ва лейкемия моделларида неопластик
жараѐнлар ривожланишида цитокинлар, ѐғларни перекисли оксидланиши
жадаллашиши ва азот оксид миқдорининг ошганлиги аниқланган;
неопластик жараѐнлар ривожланишида азот оксидининг ўрни
баҳоланган: канцерогенез даражасига боғлиқ равишда L-аргинин, азот
оксидининг қолдиқ маҳсулотлари ва периоксинитрит миқдорининг ўзгариши
метастазланишни кучайишига шарт-шароитлар яратиши исботланган;
8
канцерогенез босқичига боғлиқ равишда тажриба ҳайвонлари қон
зардоб ва жигар гомогенатида антиоксидант ҳимоя ферментининг пасайиши
ҳамда яққол гиперлипопероксидация белгиларига боғлиқлигини аниқланган;
турли неопластик жараѐнларни жадаллашишига олиб келувчи ИЛ-1, ИЛ
6 ва ФНО-α цитокинлар экспрессияси исботланган;
гепатоканцерогенез ва лейкемияда цитостатикларнинг ўсма ҳужайра
ларига қарши таъсирини кучайтиришда даво муолажаларига ронколейкин
нинг киритилиши асосланган ва доксорубицин ва гидреанинг умумий токсик
таъсирини камайтириш хусусияти исботланган.
Тадқиқотнинг амалий натижаси
қуйидагилардан иборат:
каламушларда бензол билан лейкемия чақириш модели яратилди, тавсия
этилган моделни лейкемияни олдини олишга қаратилган баҳолаш тартиби
ўрганиш ва профилактикани олидини олишни такомиллаштиришга ѐрдам
бериш исботланган;
тадқиқот натижалари асосида гепатоцеллюляр саратонни даволашда ва
онкогематологияда ронколейкинни қўллаш зарурлиги исботланган;
гепатоканцерогенез ва лейкемия молекуляр механизмларини информа цион
таъминотининг самарали усулларидан фойдаланишнинг услубий тадқиқот
даражасини ошириши зарурлиги исботланган;
неопластик жараѐнларни молекуляр механизмларини ўрганишда саратон
касаллигини даволаш учун йўналтирилган ѐндашувни кимѐ терапевтик
дорилар ўсмаларнинг қаршилигини камайтириш самарадорлигини ошириш
мумкинлиги аниқланган.
Тадқиқот натижаларининг ишончлилиги
ишда қўлланилган назарий
ѐндашув ва усуллар, олиб борилган тажрибаларнинг услубий жиҳатдан
тўғрилиги, тажриба ҳайвонлари сонининг етарли эканлиги, биокимѐвий,
статистик текшириш усуллари ѐрдамида ишлов берилганлиги, шунингдек,
тадқиқот натижаларининг халқаро ҳамда маҳаллий тажрибалар билан
таққослангани, хулоса, олинган натижаларнинг ваколатли тузилмалар
томонидан тасдиқлангани билан асосланади.
Тадқиқот натижаларининг илмий ва амалий аҳамияти.
Тадқиқот
натижаларининг илмий аҳамияти шундан иборатки, неопластик жараѐнларни
молекуляр механизмларини аниқлаш, хавфли ўсма касалликларнидаво
лашнинг замонавий схемаси ишлаб чиқилган. Рекомбинант ИЛ-2 самарадор
лигини баҳолаш шифохонада беморларни даволашда фойдаланиш учун
тавсия этилган. Ронлейкинни ўсма касалликларни даволашга татбиқ қилиш,
даволаш самарадорлигини ошириш, кимѐтерапияга ўсма ҳужайраларнинг
сезгирлигини камайтиришдан иборат.
Тадқиқот натижаларининг амалий аҳамияти шундан иборатки,
гепатоцеллюляр
ўсма
ва
лейкозларни
кимѐтерапия
ўтказишда
қўлланиладиган кимѐвий дори воситаларининг орган ҳамда тизимларга
токсик тизимли таъсирини аниқлаш учун қатор биокимѐвий ва иммунологик
кўрсаткичларни ўрганиш зарурлиги исботланган. Хавфли ўсмаларни кимѐвий
дори воситалари ѐрдамида даволаш самарадорлигини оширишда
даво воситалари таркибига ронлейкин киритилганда даволаш
9
самарадорлигини ошириш билан биргаликда кимѐвий воситаларининг
асоратларини камайтиради, фармокотерапия самарадорлигини оширади,
беморларнинг касалхонада бўлиш вақтини қисқартириб, ремиссия даврини
узайтирди.
Тадқиқот натижаларининг жорий қилиниши
: гепатоканцерогенез ва
лейкозларни молекуляр асосларини ўрганиш бўйича олинган илмий
натижалар асосида амалиѐтга татбиқ қилиш материаллари ишлаб чиқилган:
«Сурункали лейкозларнинг экспериментал модели» номли услубий
қўлланма ишлаб чиқилган ва соғлиқни сақлаш амалиѐтига жорий қилинган
(Соғлиқни сақлаш вазирлигининг 2016 йил 10 февралдаги 8Н-3/44-сон
маълумотномаси). Мазкур услубий қўлланма сурункали лейкозларнинг келиб
чиқиш сабаблари, ривожланиш механизми ва касалликни эрта аниқлаш ва
ташхислашни такомиллаштириш имконини беради;
лейкозларни кимѐвий дори воситалари билан даволашда уларнинг
заҳарлилик хусусиятларни пасайтиришда ронколейкинни қўллаш бўйича
олинган илмий натижалар «Сурункали лейкозларда кимѐвий дорилар
қўлланилганда ронколейкинни қўллашнинг тажрибада асослаш» услубий
қўлланмаси ишлаб чиқилган ва соғлиқни сақлаш амалиѐтига жорий қилинган
(Соғлиқни сақлаш вазирлигининг 2016 йил 10 февралдаги 8Н-3/44-сон
маълумотномаси). Мазкур услубий қўлланма сурункали лейкозларни
даволашни корекциялашни кимѐвий дори воситалари асосида беморларнинг
заҳарланишни олдини олишни чора-тадбирларини такомиллаштириш
имконини беради.
Гепатоканцерогенез ва лейкозларни молекуляр асосларини ўрганиш ва
ўсма касалликларни эрта ташхислаш ва самарали даволаш тизимини
такомиллаштиришга қаратилган илмий тадқиқотларнинг натижалари,
онкогемолитик беморлар ва гепатоцеллюляр ўсма касалликларни даволашда
ронколейкин ва гидреани қўллаш бўйича олинган илмий натижалар соғлиқни
сақлаш амалиѐтига, жумладан, Гематология ва қон қуйиш илмий маркази
лабораториялари ҳамда Тошкент тиббиѐт академияси институтлараро илмий
тадқиқот лабораторияси тизимларига, Гематология ва қон қуйиш илмий
маркази клиникаси амалиѐтига жорий қилинган (Соғлиқни сақлаш
вазирлигининг 2016 йил 10 февралдаги 8Н-3/44-сон маълумотномаси).
Олинган фундаментал илмий натижаларнинг амалиѐтга жорий қилиниши
хавфли ўсма касалликларни эрта ташхислаш, касалликларнинг кечиши ва
оқибатини яхшилаш, олдини олиш чора-тадбирларни такомиллаштириш,
беморлар ҳаѐт тарзини узайтириш, аҳолининг турли қатламлари орасида
хавфли
ўсма
касалликларини
рекомбинант
интерлейкин-2
билан
экспериментал даволаш, лейкоз касаллигини даволашда ҳар бир беморнинг
шифохонадаги ўрин кунини 15-20%га қисқартириш имконини берган.
Тадқиқот натижаларининг апробацияси.
Мазкур тадқиқот натижа
лари, 6 та илмий анжуманларда, жумладан 4 та халқаро конференцияда ва 2
та республика илмий амалий анжуманларида муҳокомадан ўтказилган.
Тадқиқот натижаларининг эълон қилиниши.
Диссертация мавзуси
жами 26 та илмий иш, шундан 15 та мақола Ўзбекистон Республикаси Олий
10
аттестация комиссиясининг докторлик диссертациялари асосий илмий
натижаларини чоп этиш тавсия этилган илмий нашрларда, жумладан, 13 таси
республика ва 2 таси хорижий журналларда нашр этилган.
Диссертациянинг ҳажми ва тузилиши.
Диссертация таркиби кириш,
олтита боб, хулосалар ва фойдаланилган адабиѐтлар рўйхатидан иборат.
Диссертациянинг ҳажми 179 бетни ташкил этади.
ДИССЕРТАЦИЯНИНГ АСОСИЙ МАЗМУНИ
Кириш
қисмида ўтказилган тадқиқотларнинг долзарблиги ва зарурати
асосланган, тадқиқотнинг мақсади ва вазифалари, объект ва предметлари
тавсифланган, республика фан ва технологиялари ривожланишининг устувор
йўналишларига мослиги кўрсатилган, тадқиқотнинг илмий янгилиги ҳамда
амалий натижалари баѐн қилинган, олинган натижаларнинг илмий ва амалий
аҳамияти очиб берилган, тадқиқот натижаларини амалиѐтга жорий қилиш,
нашр этилган ишлар ва диссертация тузилиши бўйича маълумотлар
келтирилган.
Диссертациянинг
«Канцерогенез механизми ва гепатоканцерогенез
ва гемобластозлар концепциясининг замонавий ҳолати»
деб номланган
биринчи бобида иш мавзусига оид адабиѐтларнинг таҳлили берилган.
Жумладан, канцерогенезнинг молекуляр механизмлари, гепатоканцерогенез
ва гемобластозларнинг тарқалганлиги, келиб чиқишининг хавф омиллари,
таснифи, унинг ташхиси ва бошқа касалликлар ривожланишидаги аҳамияти
назарий жиҳатдан таҳлил қилинган.
Диссертациянинг
«Гепатоканцерогенез ва гемобластозларни қиёсий
ўрганиш:
патогенез
ва
рекомбинант
интерлейкин-2
билан
экспериментал даволаш методологияси»
деб номланган иккинчи бобида
қўлланилган материал ва тадқиқот олиб бориш услублари келтирилган.
Экспериментал материалнинг умумий таснифи 400 та 100-120 г бўлган эркак
каламушларда Гва ҚҚИТИ экспериментал тажриба лабораториясида амалга
оширилади: тажриба 2 та серияда, яъни гепатоканцерогенез ва лейкемия
моделларида олиб борилди. 1-гуруҳда гепатоканцерогенез индукцияси учун
Евграфова модели билан гепатоканцероген ДЭНА (ошқозон ичига зонд
орқали ҳафтасига 5 марта 10 мг/кг дозада 2 ой мобайнида) киритилган 180 та
каламушдан фойдаланилди.
Тажрибанинг охирги муддатида ўткир заҳарланишдан 46 та (25,5%)
каламуш қурбон бўлди. Тажриба муддати давомида бир хил шароитда
назорат гуруҳида 20 та каламуш сақланди. Ҳайвонлар эксперимент бошидан
3, 4, 5, 6, 7 ва 8 ойдан кейин қурбон қилинди. Гепатокарцином ривожланиши
бўйича жигар морфологик тадқиқотлари натижалари билан муҳокама
қилинди. Жигарида ўсмалари бор танланган ҳайвонлар кейинги тажрибалар
учун олиб қўйилди. Тажриба бошланишидан 5 ойдан кейин тирик қолган 134
та каламуш 4 гуруҳга бўлинган эди: 1-гуруҳда 35 та гепатоканцерогенезли
каламуш 0,5 мл/100 г физиологик эритма олган; 2-гуруҳда 3 кун қорин ичига
0,006 мг/кг доксорубицин (Doxorubicin, фирма «Pharmitalia»), (Д.А. Пулатов,
11
2004) олган 33 та каламуш; 3-гуруҳда 10 кун давомида 3 маҳал (М. Н.
Бережная ва бошқ., 1992) ронколейин (фирма «Биотех», Санкт-Петербург)
0,006 мг/кг бўлган 33 та каламуш; 4-гуруҳда юқоридаги миқдорда 33 та
каламуш доксорубицин+ронколейкин олган. Даволаш жараѐни 3 ой
мобайнида босқичма-босқич 10 кун олиб борилди.
2-серияда 180 та каламушда лейкемияни қайта тиклаш учун бизнинг
усул 8 ой давомида тери остига 40% ѐғли бензол эритмси (0,01 мл100 г тана
оғирлиги) киритишни таклиф этди (Х.Я.Каримов ва бошқ., 2010). Сўнгги
муддатда 54 та каламуш (30%) ўткир заҳарланиш натижасида вафот этди.
Назорат гуруҳида 20 та каламуш тажриба муддати давомида бир хил
шароитда сақланди. Ҳайвонлар тажриба бошланганидан 3-чи, 4-чи, 5-чи,6-чи,
7-чи, ва 8 ойдан кейин қурбон қилинди. Лейкемия ривожланиши бўйича сон
суягида гемограмма ва миелограмма таҳлил қилинди. Лейкемия белгилари
бор ҳайвонлар кейинги тажибалар учун суяк кўмиги ва периферик қон
кўрсаткичлари бўйича таҳлил қилинди. 5 ойдан кейин тажриба учун тирик
қолган 126 та каламуш 4 гуруҳга бўлинди: 1-гуруҳда 33 та лейкемияга
чалинган каламушлар, 0,5 мл/100 г физиологик эритма олган; 2-гуруҳда 31 та
каламуш, гидреа олган (гидроксимочевина, гидроксикарбамид, Hydrea) қорин
ичига 20 мг/кг (К.М.Абдулкадыров, 2004); 3-гуруҳда 10 кун давомида 3
маҳал (М.Н.Бережная ва бошқ., 1992) ронколейин («Биотех» фирмаси, Санкт
Петербург) 0,006 мг/кг бўлган 31 та каламуш; 4-гуруҳда юқоридаги миқдорда
31 та каламуш гидреа+ронколейкин олган. Даволаш жараѐни 3 ой мобайнида
босқичма-босқич 10 кун олиб борилди.
Тадқиқот муддатига мувофиқ ҳайвонлар совуқ хонада енгил наркоз
билан ўлдирилди, сўнг қорин ичи очилиб, ундан жигари чиқариб олинди ва
тортилиб, ўртасидаги йиринг трис-НСl-буфер, рН 7,2,05М эритма билан
ювилди. Жигарнинг 1/3 қисми биокимѐвий тажриба учун олинди. Қолган 1/3
қисми цитокимѐвий НАДФН-диафоразани (А.И.Гоженко ва бошқ., 2000)
аниқлаш учун олинди. Жигар тўқимасининг қолган қисми морфологик
тадқиқот олиб бориш мақсадида олинди. Қон зардобида азот оксиди – L
аргинин ва NO
2
(А.С. Комарин ва бошқ, 2005), АЛТ, АСТ ферментлар
фаоллиги ва ишқорли фосфатаза, умумий оқил, альбуминҳамдаинтерлейкин
таркиби
(
ИЛ-1β, ИЛ6 ва ФНО-α) иммунофермент усулида аниқланди. Қон ва
гомогенатда антиоксидант ҳимоя ферментлари фаолияти аниқланди:
супероксиддисмутаза (СОД) (В.Г.Мхитарян ва бошқ., 1978), каталаза
(М.А.Коралюк. ва бошқ., 1988), ПОЛ маҳсулоти – малоновдиальдегид (МДА)
(Л.И.Андреева ва бошқ., 1989). Морфологик тадқиқотда периферик қон
таркибида гемоглобина, эритроцит, лейкоцит, тромбоцит аниқланди.
Каламуш сон суяги қопқоғидан суяк илигидан суртма олинди, ҳамда олинган
намуна гематоксилин ва эозин билан бўялди, суяк илиги ҳужайралари ва
морфологик тизим ҳисобланди. Олинган клиник ва лаборатор натижаларини
статистик қайта ишлаш Pentium IV компьютери ѐрдамида амалга оширилди.
Диссертациянинг
«ДЭНА-индуцирланган канцерогенезда жигарнинг
таркибий ва функционал хусусиятларини ўрганиш»
деб номланган
учинчи бобида узоқ муддатли ДЭНА гепатокарцин ривожланишига олиб
12
келиши, тажриба бошланганидан 5-6 ой ўтгандан кейин ўзгаришлар
кузатилганлиги аниқланди. Тажрибанинг 3- ва 4- ойидан кейин гепатоцит
ядро аппаратининг ўзгариши, 4-ойдан сўнг эса трабекуляр тузилишидаги
ўзгаришлар кузатилди.
Тажрибанинг 3-ойидан кейин жигарнинг морфологик текширувида
органнинг тузилмавий бирлиги сақланганлиги, гепатоцитларнинг жойлашган
ўрни меъѐрдалиги, жигар триадаси сақланганлиги, цитоплазмада хира
бўялган жойлар аниқланган. Канцерогенез инициация жараѐнинг тасдиқла
шича, гиперхромия катта ядролар билан кўп ядроли ҳужайралар гепотоцит
характерга эга. Эрта ўтказилган тажриба мақсадга мувофиқ эмас, шунингдек,
бу вақтда ДЭНА токсик таъсири намоѐн бўлган. Аммо тажриба тартибига
мувофиқ даволаш ҳафтасига 5 марта 2 ой давомида татбиқ қилинган. Бу
даврда тўсиқлараро соҳаларда тартибсиз кенгайишлар, жигар
дискомплексирланганлиги кузатилган. Формазан доналари миқдори ошган ва
азот оксиди тизими фаоллашгани кўринди ҳамда морфофункционал
соҳаларида жигар тўқималарининг бир хиллиги аниқланди (1-расм).
1-расм. Формазан доналари миқдорининг ошиши.
Ушбу натижаларга кўра, тажриба ҳайвонлари қони зардобидаги L-арги
нин даражаси интакт ҳайвонлар билан солиштирганда 1,44 марта
камайганлиги аниқланди (1-жадвал). Ўсма ҳужайраларининг бузилишида
қабул қилинган реактив азот оксиди NO°, NO
2
°, N
2
О
3
, NOO
амин
модификация кўринишида иштирок этади. Пероксинитритфаол молекуласи
NO ташкил топишида муҳим ўрин эгаллайди. Тажриба ҳайвонлари жигари
гомогенатида ва қонидаги ПОЛ жараѐни тадқиқотда аҳамиятлидир. Ушбу
кўрсаткичлар таҳлили қон плазмасида МДА даражаси ва айниқса тажриба
ҳайвонларининг жигари (52,4%) гомогенатида намоѐн бўлди, шунингдек
қонда СОД ингибири билан боғлиқ бўлган ПОЛ интенсиффикация бўлса, у
13
жигарда бир вақтнинг ўзида фаол СОД фонида каталаза даражасини
пасайтиради. Бизнинг фикримизча, NО юқори концентрацияда фаол
кислород билан ўзаро таъсирланганда пероксинитрит маҳсулотларида кўпроқ
токсиклар пайдо бўлишига олиб келади, бу мембранларнинг деструктив
жараѐнини кучайтиради. Жигар гомогенатида СОД фаол бўлишига қарамай,
у эркин радикалларга тўлиқ зарар етказмайди, шунингдек, интакт
ҳайвонларга қараганда СОД ва МДА муносабатлари кам бўлади. Промоция
босқичида (фикримизча, 4 ва 5 ойдан кейин) биокимѐвий динамик
параметрлари аввалги ўрганиш давридан жиддий фарқ қилади. Шундай
қилиб, 4 ойдан кейин L-аргининнинг даражаси янада пасайди, цитокимѐвий
усул НАДФН-диафорозада аниқланганда эса формазан доналарининг
интенсив равишда тўплангани кўзга ташланди ва жигар тўқималарида
дистрофик ўзгариш кузатилди. Бу ўзгариш ушбу даврда жигарда морфологик
қайта қуриш бошланганини тасдиқлайди.
1-жадвал
Гепатоканцерогенезда тажриба ҳайвонлари қони зардобида L-аргинин,NО
2
ва
ООNO
таркиби, M±m
Тадқиқот
муддати, ой
L-аргинин
даражаси, моль/л
NO
2
таркиби,
мкмоль/л
OONO
таркиби,
мкмоль/м
л
3 ойдан кейин
0,090±0,001***
11,64±0,076***
0,12±0,01
0,130±0,001
9,06±0,033
0,15±0,02
4 ойдан кейин
0,071±0,005***
13,97±0,024***
0,37±0,04**
0,129±0,001
9,15±0,011
0,20±0,02
5 ойдан кейин
0,068±0,001***
12,90±0,030***
0,56±0,01***
0,131±0,001
9,13±0,009
0,12±0,01
6 ойдан кейин
0,133±0,002**
9,03±0,025***
0,74±0,03***
0,125±0,002
9,18±0,015
0,16±0,01
7 ойдан кейин
0,108±0,001***
12,26±0,025***
0,17±0,01**
0,127±0,002
9,24±0,015
0,12±0,01
8 ойдан кейин
0,112±0,001***
12,91 ±0,03 1***
0,05±0,01***
0,126±0,001
9,25±0,011
0,14±0,01
Изоҳ: 1. Сурат – тажриба ҳайвонлари маълумотлари, махраж – интакт гуруҳ; 2. * -
фарқлар назорат гуруҳи кўрсаткичларига нисбатан аҳамиятли (* - P<0,05, ** -
P<0,01, *** - P<0,001).
Бундан келиб чиқадики, қон томирлардаги оқсил массаси гепатоцит
мойиллигига жавоб беради, ҳужайра полиморфизмларида акс этади, фиброз
тўқималари қаватларида юпқа кўринишда мавжуд бўлади ва васкуляризация
жараѐнини фаоллаштиради. Препаратдаги ўсма ҳужайралар кўздан
кечирилганда девор ичида кўп миқдорда кистозлар, куб шаклидаги
14
эпителий, аденокарцином намоѐн бўлади. Шу билан бирга қон зардобида
NО
2
янада ўсади, аммо ПОЛ интенсификацияси ҳам янада катталашади, агар
қон плазмасида МДА даражаси 105%, жигар гомогенати 77,2%га ўсади.
Бундай ПОЛ интенсификацияси айнан қондаги антиаксидант ҳимоя
ферментларининг фаоллик жараѐни фонда пасайган жараѐнига мансуб бўлиб,
буларнинг барчаси фаол мембраналарнинг деструктив жараѐнларини
тасдиқлайди.
Бизнинг тажрибаларимиздан кўриниб турибдики, реакция усул NO
метаболитига билвосита таъсир этади. Шунингдек, улар канцероген
бирикмаларда ўзида намоѐн этган нитрозаминлар пайдо бўлишида кучаяди.
ДНК асосининг ўзгариши, уни тизимларга бўлиш ва ингибирлаш жараѐнида
бузилган ДНК гепатоканцерогенезда промоцияланганда кучайиши мумкин,
яна кўплаб неопластик бузилган ҳужайраларнинг фаоллашишига имкон
туғдиради. Бошқа томондан қон-томир энтолийга NO таъсир этиши унинг
таркибининг ўзгаришига олиб келади бузилган ўсма ҳужайраларининг
бирикишини таъминлайди. Бу кузатув морфологик йиғилган формазан
доналари
атрофида
бузилган
ҳужайралар
ва
гепатоцитларнинг
васкуляризациясини тасдиқлайди.
Шундай қилиб, NO канцерогенезда худди агентдек, ксенобиотик
метаболизм модификатор каби антиканцероген генетик баланс бузилишида
иштирок этади. Табиий ва синтетик агентлар бу балансни тутиб туради,
шунингдек, у онкологик касаллиги билан оғриган аҳоли гуруҳида саратон
хавфини камайтиришда фойдали дори воситаси ҳисобланади. НАДФН
диафоразани аниқлашда цитокимѐвий усул гепатоцитда NO синтезининг
фаоллигини тасдиқловчи кўрсаткичлардан биридир. Бу даврда кўп миқдорда
катта-кичик кулранг-қўнғирформазан гранула гуллари борлиги, дистрофик
ўзгаришлар бор жигар доирасида ва атрофида вакуоласимон ҳужайралар
ўчоғи мавжудлиги аниқланган. Бир жинсли бўлмаган цитоплазма,
полиморфиз белгили ядро, ундаги пертрофияга учраган нуклеосома
кузатилди.
Шунингдек, ўсиб борувчи ПОЛ фонида қон плазмасида гиперлипо
пероксидация оғирлиги босқичма-босқич пасайиб борди. Бу даврда ПОЛга
бундай турлича таъсирлар гепотоцитда пероксинитритни кескин ўсишига
таъсир этади. Бошқа томондан бундай гиперфаоллик унинг қондаги пасайиш
фонида компенсатор фаол СОДнинг кўпайишида намоѐн бўлади.
Энг қизиқарли натижалар неопластик жараѐнининг тарқалишида қайд
этилади (6 ойдан кейин). Бу давр мобайнида интакт ҳайвонларда L-аргинин
даражасининг ошиши, NO
2
камайиши, баъзан бир неча ингибирланган NO
тизими шаклланади. Гистокимѐвий тадқиқотларда турли ўлчамдаги
диформазан гранулалари тартибсиз бўялганини, жигар паренхимасининг
ичида НОС зарралари аниқлиги камроқ, аммо вақти-вақти билан пайдо
бўлади. Бу ҳужайра фермент қатламларини шакллантириш ядролари кенг
соҳаларда бир неча гистологик ҳужайра гуруҳлари мавжудлиги билан
тасдиқланади. Жигарнинг оқсил синтезловчи вазифаси кучли ингибирланган
фонда аввалги муддатлар билан солиштирилганда АЛТ, АСТ фермент-
15
ларининг фаоллиги пасайганлиги аниқланди. Юқори фаол СОДни сақлаш
фонида гиперлипопер-оксидация ва жигар гомогенатида каталазалар
даражаси камайган ҳамда қонда СОД эзилиши кузатилган, бироқ
катталашган шиш ва метастазланишнинг бошланиши билан шишда NO
ўрнини қайтадан ҳосил қилиш лозим.Ташқи томондан бу қон зардобидаги L
аргинин таркибининг фонда камайишига олиб келади. Цитокимѐвий
босқичда (7-8 ойдан кейин) ҳужайра периферийларида тўпланган тўқ кул ранг
ва тўқ қўнғир гулларини тўккан формазан гранулалари таркиби кўпайиб
кетди. 7- ва 8-ойда жигар саратонининг гиперваскуляризация ва
гепатоцеллюляр карциномаси ривожланганлиги аниқланган. NO таъсири
дезагрегацион
кўринишга
эга,
эзилган
ҳужайралараро
боғланган
ҳужайраларни NO синтези кучайтиради. NO синтезининг кучайиши
ҳужайраларнинг инвазия жараѐнида тўқималарда экзоген манбалар ҳисобида
кўринади. Бу босқичда барча ферментлар тизимида деградация кузатилади,
СОД фаоллиги ва каталазанинг тезда ингибирланиши, транслация ва
транскрипция жараѐнининг бузилиши, генларинг ўзгариши, синтетик
жараѐнларнинг пасайишига олиб келади, қон зардобида жигар ферментлари
фаолллиги пасаяди.
Шундай қилиб, гепатоканцерогенез ривожланишида азот оксиди муҳим
ўрин эгаллашини тадқиқотлар кўрсатиб турибди. Патологик жараѐн даража
сида метаболит аҳамиятга эга. Цитокин ИЛ-1 нинг ушбу даражаси ўсма
жараѐни ривожини ўлчашда ИЛ-6 и ФНО-α ошиб боради (2-жадвал).
2-жадвал
Гепатоканцерогенезда калмуш қони зардобида цитокинлар миқдорини
ўзгариши (пг/мл), M±m
Гуруҳ, муддат, ой
ИЛ-1β
ИЛ-6
ФНО-α
Интакт
1,41±0,05
1,54±0,05
2,91±0,06
Тажрибадан
3 ойдан кейин
5,84±0,18***
3,44±0,24***
4,23±0,21***
4ойдан кейин
6,58±0,31***
4,27±0,19***
5,44±0,31***
5ойдан кейин
6,97±0,48***
4,98±0,23***
5,22±0,42***
6ойдан кейин
7,42±0,52***
5,66±0,34***
6.83±0,33***
7ойдан кейин
6,33±0,71***
7,34±0,37***
8.47±0,28***
8ойдан кейин
6,24±0,58***
8, 11±0,42***
10,01±0,32***
Изоҳ: * - фарқлар назорат гуруҳи кўрсаткичларига нисбатан аҳамиятли (*** - P<0,001).
Диссертациянинг
«Бензол билан заҳарланишда сурункали лейкемия нинг
ривожланиш хусусиятлари»
деб номланган тўртинчи бобида лейкемияда
биокимѐвий механизмлар таърифланади. Тадқиқотларда суяк
16
илиги ҳужайралари бузилишини солиштириш ва пролиферация жараѐнида
бензол таъсири кўрсатилади. Тажриба бошланганидан 4 ойдан кейин
каламуш суяк илигида гипоплазия 11,1%, лейкомоид реакция 50% га ўсди.
Тажриба муддатининг охирида (8 ойдан сўнг) ҳайвонларнинг 59,1%
лимфопролифератив жараѐни бошланди, миелопролифератив жараѐни
27,3%га камайди. Суяк илиги ҳужайрасида лимфопролифератив жараѐни
ривожланди. Шунингдек, каламушларда миелопролифератив жараѐн билан
тромбоцитоз намоѐн бўлган мегакариоцитар пролиферация қатори
белгиланди. Суяк илигида гипоҳужайралар билан гранулоцитар ҳужайра
миқдорини камайишини аниқлаш бу лимфоцитозга нисбатан мос ҳисоблана
ди. Маълумотлардан кўриниб турибдики, бензолнинг узоқ муддатда
каммиқдордаги
таъсири
каламушлар
суяк
илиги
ҳужайраларида
заҳарланишга олиб келди. Лейкемияда азот оксиди ўрнини аниқлашда
тажриба ҳайвонлари қонидаги L-аргинин ва пероксинитрит даражаси билан
алоқадорлигини ўргандик. Ўтказилган тадқиқотларда қон зардобида NО
2
даражасининг йирик ўзгариши кўзга ташланиб, унинг миқдори 3-6 ойда
кўтарилди, 6-7 кундан сўнг меъѐрлашди, бластомогенез босқичида эса
пасаяди (3-жадвал).
3-жадвал
Лейкемияда тажриба ҳайвонлари қон зардобида L-аргинин, NO
2
ва
ООNО
таркиби, M±m
Тажриба
муддати, ой
L-аргинин
даражаси, моль/л
NO таркиби,
мкмоль/л
ООNО
-
таркиб
и мкмоль/мл
3 ойдан кейин
0,090±0,001***
13,75±0,08***
0,11±0,01
0,130±0,001
9,06±0,03
0,15±0,02
4 ойдан кейин
0,081±0,005***
14,39±0,04***
0,43±0,03***
0,129±0,001
9,15±0,07
0,20±0,02
5 ойдан кейин
0,065±0,004***
15,29±0,03***
0,65±0,03***
0,131±0,001
9,13±0,09
0,12±0,01
6 ойдан кейин
0,103±0,003***
10,31±0,05***
0,47±0,03***
0,125±0,002
9,18±0,05
0,16±0,01
7 ойдан кейин
0,098±0,001***
9,22±0,07
0,21±0,01***
0,127±0,002
9,24±0,05
0,12±0,01
8 ойдан кейин
0,081±0,002***
8,12±0,03***
0,06±0,01***
0,126±0,001
9,25±0,08
0,14±0,01
Изоҳ: 1. Сурат – тажриба ҳайвонлари маълумотлари, махражда – интакт гу-руҳ; 2. * -
фарқлар назорат гуруҳи кўрсаткичларига нисбатан аҳамиятли (*** - P<0,001).
Шу билан бирга, заҳарли таъсири билан фақатгина азот оксиди радикали
эмас, балки уни фаол кислород шакли билан боғлиқлигини таъкидлаш лозим.
17
Тадқиқотларда айтилишича, канцерогенез босқичида NO даражаси бироз
пасаяди, индукция босқичида кескин ўсади ва метастатик ўсимта даврида
ўсиб боради. Тажриба бошланганидан 7-8 ой кейин ПОЛ жараѐнида NO
ишлаб чиқариш кўпаяди, ўсма ҳужайраларининг интенсив кўпайишини
таъминлайди ва уни бошқа орган ва тизимлар билан жойлаштирилади.
Тажриба ҳайвонлари қон зардобидаги аргинин даражаси бензолли
лейкемия ривожланиш динамикасида патологик жараѐн босқичига боғлиқ
равишда тўлқинсимон ўзгаради. Лейкозогенез
р
ивожланиш босқичида фаол
СОД эритроцитлари ўсиши камаяди, эрта босқичларда ПОЛ интенсифи
кацияси аниқланади ва кўпроқ охирги босқичда биокимѐвий жараѐнларда
сезиларли даражада эзилади.
Каламуш қон зардобидаги ИЛ-1, ИЛ-6 ва ФНО-α цитокинларни ўрганиш
билан бензолли интоксикация ИЛ-1 ва ИЛ-6 (4-жадвал) даражаларини
ошиши аниқланди.
4-жадвал
Лейкемияда каламушлар қон зардобида цитокинлар миқдори (пг/л), M±m
Гуруҳ, муддат, ой
ИЛ-1β
ИЛ-6
ФНО-α
Интакт
1,41±0,05
1,54±0,05
2,91±0,06
Тажрибадан 3 ой кейин 6,12±0,18***
4,42±0,24***
5,33±0,21***
4 ой кейин
6,81±0,31***
5,15±0,19***
6,22±0,31***
5 ой кейин
7,95±0,48***
5,96±0,23***
4,12±0,42*
6 ой кейин
4,74±0,22***
5,28±0,31***
4,68±0,28***
7 ой кейин
4,63±0,27***
7,73±0,33***
6,84±0,32***
8 ой кейин
5,62±0,31***
6,81±0,34***
7,10±0,43***
Изоҳ: * - фарқлар назорат гуруҳи кўрсаткичларига нисбатан аҳамиятли (* - P<0,05, ***
- P<0,001).
Каламуш қон зардобидаги ФНО-б таркиби билан сурункали бензолли
интоксикация 3-4 ойдан сўнг 1,83 ва 2,14 марта ошди. 5 ой охирида ФНО-α
даражаси аста-секин пасайишни бошлади, аммо ҳаммаси ҳали 1,42 (Р<0,01)
марта меъѐрий қийматга ошди. Бу йўналишдаги ўзгаришлар келажакда
муҳофаза қилинади. Ундан кейинги даврларда биз унинг даражаси тажриба
бошланганидан 7-8 ой кейин 1,5 (Р<0,05) ва 2,82 (Р<0,001) марта пасайган.
Шундай қилиб, олинган натижаларни жамлаштириш натижасида,
таъкидлашимиз жоизки, узоқ муддатли паст дозадаги бензол каламуш суяк
илиги ҳужайраларида ўзгаришларга олиб келади. Агар эрта муддатларда
лейкомоид реакцияси рўйхатдан ўтган бўлса, 5-ойнинг охирига келиб, 1/3
каламушда лейкемия ривожланади, 8 ойдан кейин эса 86,4% ҳайвонларда
ўсма касаллиги ривожланганлиги исботланди.
18
Диссертациянинг
«Гепатоканцерогенезда жигарнинг функционал
таркибий тузилишига турли фармакологик давонинг таъсири»
деб
номланган бешинчи бобида гепатоканцерогенезни даволаш натижалари
тақдим этилган. Доксорубицин – ўсмага қарши антракциклин антибиотик
гуруҳи ўсмаларни даволаш учун ишлатиладиган асосий кимѐвий дори
воситаси ҳисобланади. Доксорубициннинг таъсир механизми ўзаро ДНК
билан боғлиқ бўлиб, нуклеин кислота синтезига қаршилик қилади. У митотик
фаолиятини пасайтиради ва хромосомаларни аберрацияга чақиради,
иммунодепрессив таъсир кўрсатади. Бизнинг фармакотерапия даво
усулимизда ДЭНА-индуцирли гепатоканцерогенез доксорубициннинг пато
морфологик белгиларни сақлашга ѐрдам беради. Алоҳида гуруҳда формазан
гранулаларини ўз ичига олган атипик гепатоцитларнинг мембрана
ҳужайралари атрофида тутунсимон кўринишда йиғилганлиги аниқланди.
Чунки морфометрик цитоплазмада формазан зарралари (26,5% гача)
сақланиб, сезиларли камайиши билан белгиланади.
Кимѐтерапияда доксорубицин ИЛ-2 ишлаб чиқарилиши пасайишига
ѐрдам бериши эътиборга олинган, шунингдек, комплекс даволашга
ронколейкин киритилган. Жигар ўсма ДЭНА-индуцирни доксорубицин ва
ронколейкинни билан даволаш кўпроқ натижа берган. Бузилган канцероген
ҳужайралар атрофида унча катта бўлмаган лимфоцитлардан тузилган
мононуклеар ҳужайралар, макрофаг ва ѐш тўқима ҳужайралари аниқланди.
Йиғилган формазан гранулаларида ҳужайралараро кулранг-бинафша ранг
чизиқ кўришдаги модда аниқланди.
Доксорубицин каламуш зардобидаги нитрат даражасига сезиларли
таъсир кўрсатмади, ўша пайтда уни ронлейкин билан бирга қабул қилганда
узоқ муддатли даволашда нитрат таркиби ошди. Тажриба бошланганидан 6
ой ўтиб, L-аргинин таркиби ошган бўлсада, орадан анча муддат ўтганда сўнг
уни пасайгани аниқланди.
Даволаш схемасига ронколейкинни киритиш азот оксиди синтезидан
фойдаланишнинг кучайишига олиб келади. Бундан ташқари, L-аргинин
таркиби фақат кимѐтерапия олган ҳайвонларда нисбатан анча паст бўлиб, бу
тадқиқотларда ҳар томонлама намоѐн бўлди ва морфологик тадқиқот
натижалари ўсма жараѐнини секин ўстиришини тасдиқлади. Тажриба
ҳайвонлари қонидаги МДА таркиби тажриба бошланганидан 6 ой кейин
меъѐрий аҳамияти 19,3% га (Р<0,05) (5-жадвал) ошиши қайд этилди. 7 ойдан
сўнг ПОЛ даражаси интакт ҳайвонларга яқинлашди, тажриба охирида эса
ҳатто 42% (Р<0,05) дан пасайди.
Каламуш зардобида МДА даражаси аниқ ошди. Янада кўпроқ ошгани
ронколейкин билан комплекс даволашда кузатилди. Бу азот оксиди
даражасининг ошишиш билан L-аргинин таркиби пасайишига олиб келди.
Ронколейкиннинг ижобий таъсирини ташхислашда ўсмаларнинг ўсишига
таъсир этади ва Т- ҳамда В-лимфоцит, моноцит, макрофаг ва бошқа
ҳужайраларни фаоллаштиради. Албатта, ўсма нисбий оғирлигининг
камайишига қарши кимѐтерапия доксорубицин иммун тизимида ҳам катта
мувозанатга олиб келди.
19
Лимфоцит ва Т-лимфоцитнинг умумий таркиби даволашнинг биринчи
босқичида ошди, охирида эса пасайди. Тажриба давомида олинган
ҳайвонларда СD4+ даражаси жиддий фарқ қилмади, аммо СD8+ сезиларли
равишда пасайди. Янада аниқ ўзгаришларига учрамаган ҳайвонларда СD16+
ва СD19+ таркиби янада пасайди.
Доксорубицин ва ронколейкин бирга қўлланилганда махсус ва махсус
бўлмаган иммун ҳимоясини кучайтирди. Бу ўсманинг нисбий оғирлигининг
пасайиши билан бир вақтга тўғри келди. Кимѐтерапия босқичида
доксорубицин ФНО-α 3,66±0,16 пг/млгача (Р
1
<0,001 ва Р
2
<0,05) нинг юқори
даражасини пасайишига ѐрдам берди ва яна паст таркибли ИЛ-1β 3,05±0,13
пг/мл(Р
1
<0,001 ва Р
2
<0,05) гачани кўпроқ кучайтирди. Доксорубицин ва
ронколейкин бирга қўлланилганда уларнинг даражаси ФНО-α ва ИЛ
1βтегишли таркиб 7,29±0,43 (Р
1
<0,001 ва Р
2
<0,05) ва 13,25±0,79 пг/мл
(Р
1
<0,001 ва Р
2
<0,001). Бизнинг тажрибамиздаги дори воситаси индуцир
ўсмага қарши таъсирли бўлиб, ҳайвонларнинг ушбу гуруҳида ўлим
кўрсаткичини пасайтиради ва гепатоканцерогенез жараѐнини
секинлаштиради.
5-жадвал
Гепатоканцерогенезда каламуш қонида МДА миқдори ва антиоксидант
ферментлар фаоллиги, M±m
Гуруҳ, муддат
МДА, нмоль/мл
СОД, оқсил мг
шартли
бирлиги /дақ.
каталаза,
оқсил
мкмольН
2
О
2
/д
ақ. мг
6 ой: интакт
3,77±0,16
0,212±0,011
0,218±0,015
1
4,50±0,27*
0,103±0,002***
0,311±0,021**
2
7,64±0,37***^^^ 0,089±0,002***^^^ 0,162±0,011**^^^
3
6,88±0,34***^^^ 0,134±0,012***^^^
0,241±0,017^
4
5,01±0,26**
0,111±0,008
0,296±0,014**
7 ой
:
интакт
4,12±0,32
0,227±0,014
0,224±0,015
1
4,22±0,19
0,078±0,001***
0,170±0,015*
2
7,13±0,28***^^^ 0,061±0,004***^^ 0,098±0,005***^^
^
3
6,58±0,24***^^^ 0,128±0,012***^^
0,153±0,011**
4
5,77±0,16***^^^ 0,141±0,011***^^^
0,187±0,009*
8 ой: интакт
4,34±0,14
0,226±0,011
0,239±0,011
1
2,52±0,18***
0,060±0,001***
0,185±0,013**
2
5,78±0,22***^^^ 0,047±0,002***^^^
0,091
±0,004***^^^
3
5,12±0,11**^^^ 0,078±0,003***^^^ 0,138±0,007***^^
4
3,21±0,14***^ 0,095±0,004***^^^ 0,165±0,009***
Изоҳ: * - фарқлар назорат гуруҳи кўрсаткичларига нисбатан аҳамиятли (* - P<0,05, ** -
P<0,01, *** - P<0,001); ^ - фарқлар 1 гуруҳи (даволанмаган) кўрсаткичларига
нисбатан аҳамиятли (^ - P<0,05, ^^ - P<0,01, ^^^ - P<0,001).
20
Диссертациянинг
«Сурункали лейкемия ва унинг биокоимёвий
кўрсаткичларига турли дори воситаларнинг таъсири»
деб номланган
олтинчи бобида экспериментал лейкемияни даволаш натижалари тақдим
этилди. Фармокотерапия лейкемия гидреа периферик қондаги ҳужайраларни
суяк илиги ҳужайраларига алмаштириш имконини камайишига олиб келди.
Бироқ ушбу дори умумтоксик таъсирга эга камқонлик ва геморрагик
синдромни оширди. Шу билан бирга, тажриба бошланганидан 6-7 ва 8 ойдан
кейин L-аргинин таркиби даволанмаган ҳайвонлар гуруҳи билан
солиштирилганда 49,5; 34,7 ва 71,6% га ошди. Бундай ўзгариш фонда
даволашнинг биринчи босқичидаѐқ азот оксиди даражасининг 1,31 марта
пасайишига олиб келди. Кейинчалик азот оксиди таркиби аста-секин ўсиб
борди ва тадқиқот муддати тугагач, 1-гуруҳдаги каламушларда 1,22 (Р<0,05)
марта ошди. Бироқ пероксинитрит таркиби лейкемия гидреани даволашда
1,23; 1,62 (Р<0,001) ва 3,83 (Р<0,001) марта ўсди. Бу тажриба ҳайвонлари
зардобида ПОЛ жараѐнининг фаоллашишига ѐрдам берди, қон зардобида
МДА
даражаси
даволашнинг
1-2-3
босқичларида
даволанмаган
каламушларда 1,24 (Р<0,05); 1,52 (Р<0,05) ва 2,1 (Р<0,01) марта ўсди
(6-жадвал).
Паст фаолиятли СОД ва каталазада янада кўпроқ ўзгаришлар пайдо
бўлди. Лейкемия гидреа билан даволаганда ИЛ-1βва ИЛ-6 1,42 (Р<0,05) ва
1,14 нинг юқори даражаси пасайди, даволашнинг 1-босқичида ФНО-α
таркиби сезиларли даражада ўзгармаганлиги аниқланди.
Жигарда ДЭНА-канцерогенез ўсиши аста-секин NО-синтази таркибини
кучайтирди, охирги муддатларда эса мусбат ферментларнинг боғланиши
кўпчиликни ташкил этди. Бир вақтнинг ўзида бир тўлқинли ўзгариш азот
оксиди маҳсулотларидан бирининг таркибида қайд этилди. Фаол радикал
кислород туфайли юқори токсинли пероксинитритнинг пайдо бўлишига
ингибирланган СОД сабаб бўлди. Канцерогенез босқичида унинг даражаси
бир неча марта пасайган, сўнгра индукция пайтида эса тез ўсган ва
метастазланиш ўсма жараѐнида камайган. Ўсма ўсиш жараѐнида ИЛ-1β, ИЛ
6 ва ФНО-α цитокин даражаси ривожланди.
Узоқ муддатда паст қийматли бензол қабули каламушнинг суяк илиги
ҳужайраларида қон аралашмаларининг бузилишига олиб келди. Эрта
муддатларда сурункали лейкоз ривожланган каламушнинг 1/3 қисми
бешинчи ойининг охирига бориб лейкемоид реакцияга чидамади, саккизинчи
ойдан кейин эса ўсма ривожланган ҳайвонлар миқдори 86,4%гача кўпайди.
Биокимѐвий тадқиқотларда кўрсатилишича, 5-6-ойларда (индукция босқичи)
пероксинитрит даражасининг тез ошгани ва метастатик ўсма жараѐнида тез
пасайганлиги аниқланди.
Тажриба ҳайвонлари қонининг зардобидаги L-аргининтаркиби - азот
оксидининг охирги маҳсулотлари даражаси шунга мувофиқ ўзгарганлигини
исботлади. Бу ўзгаришлар каламуш зардобида МДА даражасининг силжиш
21
динамикасига тўғри келди. СОД фаолияти ва қондаги каталаза барча
муддатларда айниқса кўпроқ охирги босқичда пасайганлиги кўрсатади.
6-жадвал
Лейкемияда каламуш қонида МДАмиқдори ва антиоксидант ферментлар
фаоллиги, M±m
Гуруҳ, муддат
МДА, нмоль/мл
СОД,
Оқсил шартли
бир./мин.мг
каталаза,
мкмоль оқсил
Н
2
О
2
/мин. Мг
6 ой: интакт
3,77±0,16
0,212±0,011
0,218±0,015
1
5,45±0,21***
0,113±0,008***
0,131±0,012***
2
6,76±0,53***^
0,082±0,004***^^
0,116±0,013***
3
4,68±0,33*
0,144±0,017**
0,172±0,017*
4
5,62±0,62*
0,121±0,018**
0,166±0,016*
7 ой: интакт
4,12±0,32
0,227±0,014
0,224±0,015
1
4,42±0,19
0,087±0,004***
0,117±0,009***
2
6,71±0,72**^^
0,061±0,004***^^^ 0,098±0,005***
3
5,65±0,44*^
0,136±0,017**^
0,153±0,011**^
4
5,79±0,66*
0,141±0,015**^^
0,138±0,013**
8 ой: интакт
4,34±0,14
0,226±0,011
0,239±0,011
1
2,75±0,18***
0,056±0,003***
0,085±0,006***
2
5,78±0,22***^^^
0,044±0,003***^
0,079 ±0,004***
3
4,60±0,31^^^
0,077±0,005***^^ 0,113±0,006***^^
4
5,32±0,34*^^^
0,059±0,004***
0,106±0,007***^
Изоҳ: * - фарқлар назорат гуруҳи кўрсаткичларига нисбатан аҳа-миятли (* - P<0,05, ** -
P<0,01, *** - P<0,001); ^ - фарқлар 1 гуруҳи (даволанмаган)
кўрсаткичларига нисбатан аҳамиятли (^ - P<0,05, ^^ - P<0,01, ^^^ -
P<0,001).
Сурункали бензол интоксикация даражаси мавжуд каламушларда
ялиғланишга қарши цитокинлар ўсма ривожланиш жараѐнида ошди.
Таъкидлашимиз жоизки, гепатоканцерогенез ва лейкемияни даволашда турли
дори воситаларидан кўра, цитостатик билан ронколейкин бирикмасини қабул
22
қилиш натижасида кўплаб ижобий натижалар олинганини қайд этишимиз
жоиз.
ХУЛОСА
«Гепатоканцерогенез ва гемобластозларни қиѐсий ўрганиш: патогенез ва
рекомбинант интерлейкин-2 билан экспериментал даволаш» мавзусидаги
докторлик диссертацияси бўйича олиб борилган тадқиқотлар натижасида
қуйидаги хулосалар тақдим этилди:
1. Гепатоканцерогенезнинг эрта босқичларида асосан оқариб бўялган
цитоплазма билан гипертрофил кўп ядроли ҳужайралар, атипизм ҳужайра
ларининг белгилари аниқланди. Тажриба бошланганидан 5 ой ўтиб, кейин
гепатоцеллюляр саратоннинг хавфли ўчоғи пайдо бўлди ва тажриба охирида
гепатоцеллюляр карцинома ўчоғи ҳамда паренхиманинг
гиперваскуляризациясининг аниқ белгилари кўринди.
2. Узоқ муддатда паст дозада бензол киритишнинг эрта босқичида
асосан лейкомоид реакция белгилари пайдо бўлди, бешинчи ой ўтиб, 1/3
каламушларда сурункали миело ва лимфопролифератив жараѐн белгилари
кўпайди, саккизинчи ойдан кейин эса ўсма касаллиги билан касалланган
ҳайвонлар миқдори 86,4% гача ўсди.
3. Тажрибанинг 3-4-ойидан кейин ДЭНА киритилиши бошлангандан ѐки
бензолда NO таркибини ошириш фонида L-агрениннинг даражаси пасайгани
кузатилди. 5-7-ойдан сўнг биринчи ва иккинчи йўналишда неоплатсик
жараѐн ривожланиши камайди, тажриба охирида яна ангиогенез ҳамда
метастазланишни ривожлантириш учун азот оксиди – L-аргинин тизими
фаолияти қайд этилди.
4. 3-4-ойдан кейин ДЭНА-индуцир канцерогенезда МДА даражаси ўсиш
суръати кузатилди, 3-5-ойдан кейин жигар гомогенатида иницир неопластик
жараѐн билан боғлиқлиги аниқланди. Узоқ муддатда хусусан тажриба
охирида ўсманинг катта ўчоғи туфайли унинг даражаси аста-секин пасайди.
Шундай кўринишдаги ўзгаришлар сурункали миело- ва лимфопролифератив
жараѐни аниқланди, бироқ уларда бироз характерли белгилар мавжуд.
5. Гепатоканцерогенезнинг ўсиши жараѐнида жигар гомогенатида СОД
фаолияти 3-ойдан кейин ўсди, 4-ойдан кейин пасайди, 5-6-ойдан кейин
кескин фаоллашди, охирги пайтда эса жиддий ингибирлашди. Сурункали
бензол
интоксикация
фаолиятида
миело-
ва
лимфопролифератив
жараѐнининг кучайиши билан бирга қондаги ҳимоя антиоксидант
ферментлари тезда пасайди.
6. Гепатоканцерогенез динамикасида ва сурункали лейкозда цитокин
ИЛ-1β ва ИЛ-6 даражаси ўсма ривожланиш жараѐнида ўсди. Бунинг
натижасида ИЛ-1β синтези белгилари кўпроқ таъсирланди. ФНО-α таркиби 6
ойгача
ошиб
борди,
кейин
эса
кескин
пасайди.
Миело-
ва
лимфопролифератив жараѐнда тажриба ҳайвонлари зардобида цитокин
таркиби кўп ўзгарди.
23
7. Жигар индицир ўсмасини даволашда доксорубицин билан ронко
лейкин бирикмаси таъсирида жигар тўқималарида турли самарали
морфологик ўзгаришлар рўйберди.
8. Айнан цитостатик ронколейкин боғланганда азот оксиди – L-аргинин
тизимини
стабиллаштиришда
ѐрдам
берди.
ПОЛ-АОЗ
тизимида
гепатоканцерогенез ва сурункали лейкемияда оксидлаш ва антиоксидлаш
жараѐнини кучайтиради, мутант ҳужайраларда цитотоксик ўлим чақиради,
ўсиш жараѐни тезлигини камайтиради.
9. Ўсмаларни дори воситалари билан даволашда доксорубицин
гепатоканцерогенез ва гидреа лейкемияда цитокин таркибини янада кўпроқ
оширди, ушбу дори воситасининг ронколейкин билан бирикмасини эса бироз
секинлаштиради, иммун тизими ўсмага қарши фаолиятни таъминлади.
Кўпроқ ўзгаришлар ДЭНА-канцерогенезда қайд этилди.
24
НАУЧНЫЙ СОВЕТ DSc.27.06.2017.Tib.30.03 ПО ПРИСУЖДЕНИЮ
УЧЁНЫХ СТЕПЕНЕЙ ПРИ ТАШКЕНТСКОЙ МЕДИЦИНСКОЙ
АКАДЕМИИ
НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ ИНСТИТУТ ГЕМАТОЛОГИИ
И ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ
КАСЫМОВА ГУЛЬМИРА ГАФУРОВНА
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОКАНЦЕРОГЕНЕЗА И
ГЕМОБЛАСТОЗОВ: ПАТОГЕНЕЗ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ
ТЕРАПИЯ РЕКОМБИНАНТНЫМ ИНТЕРЛЕЙКИНОМ-2
14.00.16 – Нормальная и патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ ДОКТОРСКОЙ (DSc) ДИССЕРТАЦИИ
ПО МЕДИЦИНСКИМ НАУКАМ
Ташкент – 2017
25
Тема докторской диссертации (DSc) зарегистрирована в Высшей аттестацион
ной комиссии при Кабинете Министров Республики Узбекистан за В2017.1.DSc/Tib9
Докторская диссертация выполнена в научно-исследовательском институте гемато
логии и переливания крови.
Автореферат диссертации на двух языках (узбекском, русском) размещен на веб
странице по адресу www.tma.uz и Информационно-образовательном портале «ZiyoNet» по
адресу www. ziyonet.uz.
Научный консультант: Каримов Хамид Якубович
доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты: Сабирова Рихси Абдукадировна
доктор медицинских наук, профессор
Зокиров Ёркин Узуевич
доктор медицинских наук, профессор
Пулатов Дониёр Анварович
доктор медицинских наук, профессор
Ведущая организация:
ФГАОУВО Первый Московский государственный медицин ский
университет имени И.М.Сеченова (Сеченовский универ
ситет) (Российская Федерация)
Защита диссертации состоится «____»_____________2017 года. в ____часов на засе
дании Научного совета DSc.26.07.2017.Tib.30.03 при Ташкентской медицинской академии
(адрес: 100109, Ташкент, ул. Фароби, 2, Зал заседания 1-го учебного корпуса Ташкентской
медицинской академии. Тел./Факс: (+99871) 150-78-25, e-mail: tta2005@mai.ru).
С докторской диссертацией можно ознакомиться в Информационно-ресурсном цен
тре Ташкентской медицинской академии (зарегистрирован № ___). Адрес: 100109, г. Таш
кент, ул. Фаробий, 2. Ташкентская медицинская академия, 2 учебный корпус «Б» крыло, 1
этаж, 7 кабинет. Тел./Факс: (+99871) 150-78-14).
Автореферат диссертации разослан: «____»_________________________2017 года
(реестр протокола рассылки № ___от«____»_________________________2017 года).
Г. И. Шайхова
Председатель научного совета по
присуждению учѐной степени
доктора наук, д.м.н., профессор
Н.Ж. Эрматов
Учѐный секретарь научного совета по
присуждению учѐной степени
доктора наук, д.м.н., доцент
Б.У. Ирискулов
Председатель научного семинара
при научном совете по присуждению
учѐной степени доктора наук,
д.м.н., профессор
26
ВВЕДЕНИЕ (аннотация докторской диссертации)
Актуальность и востребованность темы диссертации.
Развитие зло
качественных опухолей среди населения земного шара во многом связано с
такими факторами, как хроническое курение табачных изделий, использова
ние различных пищевых добавок и консервантов, стрессы, рентгеновское об
лучение, а также с неблагоприятным воздействием других внешних факто
ров, доля которых составляет 85% всех отрицательных воздействий. «В мире
приблизительно 6 миллионов человек болеют злокачественными новообра
зованиями (ЗНО); от гепатоцеллюлярного рака (ГЦР) ежегодно погибает
свыше 1 миллиона человек, частота лейкоза составляет 13,2 случая на
100.000 населения, в 60% случаев ЗНО являются причиной потери трудоспо
собности и инвалидизаций»
1
.
С первых лет независимости республики Узбекистан полностью
перестроена система оказания медицинской помощи населению, в частности,
в медицинскую практику внедряются современные эффективные методы
диагностики и лечения злокачественных новообразований, что привело к
уменьшению
распространения
среди
различных
слоев
населения
онкологических заболеваний. Внедрение в клиническую практику
широкомасштабных мероприятий по раннему выявлению неопластических
процессов, внедрению эффективных методов лечения и снижению
токсического воздействия полихимиотерапии при лечении злокачественных
заболеваний способствовало «удлинению продолжительности жизни
больных на 3-5 лет»
2
.
В мире проводятся научные исследования, направленные на создание
фундаментальных основ изучения общих и специфических молекулярных
механизмов злокачественного перерождения; на разработку мероприятий по
профилактике злокачественных новообразаований; ранних методов диагно
стики и эффективных способов лечения больных с опухолями. Выясняются
механизмы ответной реакции злокачественных клеток на внешние
воздействия в виде пролиферации, апоптоза, изменения функциональной
активности. Проводится разработка критериев объективной оценки
пролиферативной активности злокачественных клеток и активности
ферментов антиоксидантной защиты; обоснование факторов, определяющих
показатели летальности от злокачественных новообразований; приобретает
особую значимость совершенствование консервативных методов лечения
опухолей; внедрение иммунокорректоров широкого спектра действия в
комплекс лечебных мероприятий в отношении злокачественных опухолей;
оптимизация тактики лечения, снижение побочных действий химических
лекарственных средств и повышение эффективности лечения.
Данное диссертационное исследование в определенной степени служит
решению задач, предусмотренных Постановлением Президента Республики
1
ЖССТ Европа регионида асосий саломатлик кўрсаткичлари. ЖССТ, 2014 йил.
2
Соғлиқни сақлаш вазирлигининг хисоботлари
27
Узбекистан №ПП-1652 от 28 ноября 2011 года «О мерах по дальнейшему
углублению реформирования системы здравоохранения», а также других
нормативно-правовых документов, принятых в данной сфере.
Соответствие исследования с приоритетным направлением разви
тия науки и технологий республики.
Диссертационная работа выполнена в
соответствии сприоритетными направлениям развития науки и технологий
республики VI. «Медицина и фармакология».
Обзор зарубежных научных исследований по теме диссертации
3
.
Изучению молекулярных механизмов опухолевого роста и совершен
ствованию консервативных методов лечения посвящены научные исследова
ния ведущих научных центров и высших учебных заведений, в частности:
University of Oklahoma, Boston University, National Cancer Institute (США);
Universitat Autonoma de Barcelona (Испания), Osaka University; Hokkaido
University (Япония); Department of Immunology and Chronic Disease Research
Center and Institute for Medical Science, Occupational Safety and Health Research
Institute (Корея), Korea Occupational Safety and Health agency, Division of
Hematology-Oncology, Ewha Womans University (Корея); Российский онколо
гический научный центр, Институт гематологии и переливания (Узбекистан).
Получен ряд важных научных и практических результатов по ранней
диагностике и профилактике онкологических заболеваний, в частности:
доказан риск развития лейкемии и миеломы при воздействии бензола и
других органических соединений (Occupational Safety and Health Research
Institute (Корея); доказана роль молекулярных нарушений Y-хромосомы в
развитии гемобластозов (University of Oklahoma Health Sciences Center
(АҚШ); выяснен механизм действия биопрепаратов в лечении
онкологических заболеваний (Osaka University (Япония); установлена гепато
сплено- и нефротоксичность препарата иматиниб, используемого в лечении
миелопролиферативных заболеваний (Universitat Autonoma de Barcelona
(Испания), Division of Hematology-Oncology, Ewha Womans University,
(Корея); изучена эпидемиология распространения злокачественных
заболеваний и разработан их современный диагностический алгоритм
(University of Oklahoma Health Sciences Center, Boston University, National
Cancer Institute (АҚШ); доказана эффективность применения транс
ретиноидной кислоты в лечении онкологических заболеваний(Gifu
University; Kinki University (Япония); установлены молекулярно генетические
механизмы развития некоторых злокачественных заболеваний, разработаны и
внедрены в лечение онкологических заболеваний генномодифицированные
препараты (Российский онкологический научный центр, Россия),
разработаны модели экспериментального лечения
3
Обзор зарубежных научных исследований по теме диссертации: https://www.ou.edu/, http:/ /www.bu.edu/,
https://www.cancer.gov/,http://www.uab.cat/web/universitat-autonoma-de-barcelona.html,http://-www.osaka
u.ac.jp/en,https://www.oia.hokudai.ac.jp/,http://www.aseic.org/expert,https://www.ewha.ac.kr/mbs-/ewhaen/, http:
//www.bloodscience.ru/,http://qonber.uz/pages/pages_uz/news.html,http://www.ouhsc.edu/,https://www.bumc.
bu.edu/busm/cancer-center/, http://www.gifu-u.ac.jp/en/,http://www.kindai.ac.jp/english/ и других источников.
28
гепатоканцерогенеза и гемобластозов интерлейкином-2 (научно
исследовательский институт гематологии и переливания крови, Узбекистан).
В мире продолжаются научные исследования по приоритетным направ
лениям в области онкологии: профилактике распространения злокачествен
ных новообразований, изучению молекулярных механизмов, в частности
канцерогенного риска химических соединений; молекулярной генетике опу
холевого роста; исследование микроокружения опухоли, роли иммунных ме
ханизмов и системы оксида азота в процессах неоплазии; токсичности хи
миопрепаратов и развития резистентности опухолевых клеток; разработке и
совершенствованию диагностических критериев ранней диагностики и лече
ния гепатоцеллюлярного рака и онко-гематологических заболеваний.
Степень
изученности проблемы.
Исследованиями ученых дальнего (Dougan M.,
Dranoff G., 2009; CaiL. L. еt al., 2012; Pere H., Tanchot C., Bayry J. еt al., 2012)
и ближнего (Харченко Е. П, 2011; Чечина О. Е и др., 2011; Савина Н.П., 2013)
зарубежья было показано, что основными механизмами наруше ния апоптоза
в опухолевых клетках являются: мутации в генах, контролиру ющих этот
процесс, изменение компонентов суперсемейства гена фактора некроза
опухоли (ФНО-α), капсаз, цитотоксичсских Т-лимфоцитов и нату ральных
киллеров (ЕК), убивающих опухолевые клетки, и др. Пытаясь этому
воспрепятствовать, опухолевые клетки активируют процессы, позволяющие
им заблокировать апоптоз, и, таким образом, повысить свои шансы на выжи
вание (Рязанцева Н.В., Китайгородова Е.В., Марошкина А.Н. и др., 2012; Ле
енман Е. Е., Мухина М. С., 2013; Fredly H., Ersver E., Gjertsen B. T., Bruserud
O., 2011). В этих процессах важную роль выполняет оксид азота. По мнению
X. Маеды (1998), в тканях многих солидных опухолей содержатся повышен
ные уровни индуцибельной формы NО-синтазы (iNOS). Образуемый этим
ферментом оксид азота способствует повышению проницаемости сосудов,
что увеличивает приток питательных веществ к ткани опухоли и обеспечива
ет быстрый еѐ рост. Однако действие его весьма противоречиво, а механизм
двойственности определяется стадией развития опухоли и количеством син
тезированного оксида азота.
В Республике Узбекистан также имеется ряд научных исследований по
рассматриваемой проблеме: профессора Х. Я. Каримова, посвященных ис
следованию механизмов канцерогенеза, профессора Д. А. Пулатова по иссле
дованию гепатоцеллюлярного рака, профессора Ф. Х. Иноятовой по исследо
ванию NO-эргической системы и перекисного окисления липидов, М. Т. Му
хаммедовой по изучению роли оксида азота при гепатоканцерогенезе.
Прогресс химиотерапии в онкологии позволил значительно повысить
выживаемость больных и улучшить качество их жизни. Однако даже новей
шие химиотерапевтические препараты оказывают токсическое воздействие
на все ткани организма. Эти факторы ограничивают возможности клиниче
ского применения цитостатиков и заставляют постоянно искать новые сред
ства и способы лечения опухолевых заболеваний. Перспективным и в этом
плане являются иммунотоксины, цитокины, моноклональные антитела. В
1998 году Российским онкологическим научным центром и кампанией «Био-
29
тех» из дрожжей был получен препарат интерлейкина (ИЛ-2) - ронколейкин,
активизирующий процессы апоптоза, коррегирующий дисбаланс про- и про
тивоапоптотических факторов, ингибирующий ангиогенез.
Проблема формирования неопластических процессов, общие и специ
фические их особенности при поражении различных органов и систем, а
также изыскание путей химиотерапии с применением биорегуляторов явля
ется одним из малоизученных аспектов экспериментальной медицины. Все
это требует продолжения углубленных исследований данной проблемы с це
лью повышения эффективности химиотерапии онкологических заболеваний.
Связь диссертационного исследования с планами научно-исследо
вательскими работами научно-исследовательского учреждения, где вы
полнена диссертация.
Диссертационное исследование выполнено в Научно
исследовательском институте гематологии и переливания крови в рамках
плана прикладного гранта «Анализ роли некоторых герпес-вирусных инфек
ций и гено-фенотипических сетей противовирусного иммунного ответа в
клиническом течении хронических форм гемобластозов» (2012-2016 гг.).
Цель исследования:
выявление специфических особенностей молеку
лярных механизмов неопластического перерождения (на примере гепатокан
церогенеза и лейкемии) и изыскание новых, более совершенных способов их
лечения.
Задачи исследования:
определить особенности изменений выработки оксида азота (активность
НАДФ.Н-диафоразы и содержание нитрита натрия) при гепатоканцерогенезе
и лейкемии;
выяснить особенности изменений процессов перекисного окисления ли
пидов (ПОЛ) и активности ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) в кро
ви при гепатоканцерогенезе и лейкемии;
определить особенности изменений уровня интерлейкинов при гепато
канцерогенезе и лейкемии;
осуществить морфологическую оценку эффективности включения рон
колейкина в комплекс фармакотерапии гепатоканцерогенеза и лейкемии.
провести оценку эффективности ронколейкина при совместном введе нии с
цитостатиками в коррекции нарушений биохимических и имунологи ческих
показателей при гепатоканцерогенезе и лейкемии.
Объектом исследования
являлись 400 половозрелых крыс-самцов: 180
- с диэтилнитрозамин-индуцированным гепатоканцерогенезом (ДЭНА); 180 -
с лейкемиейпри введении бензола; 40 – интактные животные.
Предмет исследования:
комплексный анализ сыворотки крови, цельной
крови, клеток костного мозга, ткани печени экспериментальных животных.
Методы исследования.
Для решения поставленных задач и достижения цели
исследования в работе были использованы морфологические, цитохи
мические, цитологические, иммуноферментные, биохимические и статисти
ческие методы исследования.
30
Научная новизна исследования:
установлены значимость уровня оксида азота, интенсификации ПОЛ,
гиперпродукции цитокинов при неопластических перерождениях на моделях
гепатоканцерогенеза и лейкемии;
доказана роль оксида азота в развитии неопластических процессов: со
держание L-аргинина, конечных продуктов оксида азота и пероксинитрита
изменяется в зависимости от стадии канцерогенеза, определяя условия для
прогрессирования и метастазирования;
установлена зависимость выраженности гиперлипопероксидации и
снижения активности ферментов антиоксидантной защиты в гомогенате пе
чени и сыворотке крови экспериментальных животных от стадии канцероге
неза;
доказана экспрессия цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО-α при канцерогене
зе по мере прогрессирования неопластического процесса, особенно при лей
кемии;
обосновано включение ронколейкина в повышении противоопухолево
го действия цитостатиков при гепатоканцерогенезе и лейкемии, уменьшении
общетоксического действия доксорубицина и гидреа.
Практические результаты исследования
заключаются в следующем:
создана модель лейкемии введением крысам бензола, созданная модель
лейкемии позволила раскрыть механизм их развития, доказана возможность
ее использования в оценке эффективности и совершенствовании лечебно
профилактических мероприятий;
на основе полученных результатов обоснована целесообразность
включения ронколейкина в комплекс лечения гепатоцеллюлярного рака и
гемобластозов;
доказана эффективность применения высокоинформативных современ
ных методов в расшифровке молекулярных механизмов гепатоканцерогенеза
и лейкемии;
установлена значимость выяснения молекулярных механизмов разви
тия неопластических процессов в совершенствовании целенаправленной те
рапии злокачественных опухолей, повышении эффективности фармакотера
пии, снижении резистентности опухолевых клеток к химиопрепаратам.
Достоверность результатов исследования
подтверждается методологи
ческим подходом; методически правильным планированием эксперимен
тальных исследований; достаточным количеством использованных живот
ных; стандартизацией забоя животных и получения биологического материа
ла; использованием современных биохимических, иммунологических, цито
логических и морфологических исследований; обоснованным набором мето
дов статистического анализа, а также их корректным применением; получен
ные результаты основываются на сопоставлении с зарубежными и отече
ственными исследованиями; заключения, полученные результаты были под
тверждены полномоченными структурами.
31
Научная и практическая значимость результатов исследования.
Теоретическая значимость результатов исследования заключается в
разработке современных схем лечения злокачественных опухолей на основе
выяснение молекулярных механизмов развития неопластических процессов.
Выявление высокой эффективности ронколейкина в замедлении неопласти
ческих процессов позволило рекомендовать его применение в клинике при
лечении злокачественных новообразований. Применение ронколейкина в
клинической практике при лечении злокачественных новообразований при
ведет к повышению чувствительности опухолевых клеток к химиотерапии и
к улучшению результатов лечения,
Практическая значимость результатов исследования состоит в том, что
при проведении полихимиотерапии лейкозов и гепатоцеллюлярного рака до
казана необходимость определения ряда биохимических и иммунологиче
ских показателей, отражающих токсическое системное действие химиопре
паратов на органы и системы. Внедрение ронколейкина в комплекс терапии
злокачественных новообразований позволит повысить эффективность фар
макотерапии, снизить резистентность опухолевых клеток к химиопрепара
там, и частоту осложнений химиотерапии, сокращению пребывания больных
в стационаре, удлинению ремиссии.
Внедрение результатов исследования.
На основе научных результатов
по изучению молекулярных основ развития гепатоканцерогенеза и лейкозов
разработаны материалы внедрения в практику:
создана методические рекомендации «Экспериментальные модели хро
нических лейкозов», которые внедрены в практическое здравоохране
ние(заключение Министерства здравоохранения Республики Узбекистан 8Н
3/44 от 10.02.2016 г.). Данные методические рекомендации позволяет выявить
основные факторы, приводящие к развитию лейкозов, механизм их развития,
обеспечить раннее выявление заболевания.
На основе результатов, полученных при оценке эффективности приме
нения ронколейкина в снижении токсических свойств химиотерапевтических
препаратов, применяемых для лечения гепатоцеллюлярного рака и лейкемии,
созданы методические рекомендации «Экспериментальное обоснование
применения ронколейкина в химиотерапии лейкозов» (заключение Мини
стерства здравоохранения Республики Узбекистан 8Н-3/44 от 10.02.2016 г.).
Данные методические рекомендации позволяют существенно снизить побоч
ное действие химиотерапевтических препаратов, повысить эффективность
лечения.
Результаты исследований молекулярных основ гепатоканцерогенеза и
лей кемии, ранней диагностики злокачественных новообразований,
совершенство вание способов их лечения с применением ронколейкина в
комплексе с химио препаратами, внедрены в практическое здравоохранение, в
частности, в дея тельность научной лаборатории научно-исследовательского
института
гемато
логии
и
переливания
крови,
межвузовской
научно-исследовательской лабора тории Ташкентской медицинской академии,
клиники отделения лейкозов науч но-исследовательского института
гематологии (заключение Министерства
32
здравоохранения Республики Узбекистан 8Н-3/44 от 10.02.2016 г.). Внедрение
основных результатов проведенного фундаментального исследования способ
ствует ранней диагностике острого лейкоза и других злокачественных
новообразований, улучшает течение и прогноз заболевания, качество жизни
больных, снижает количество осложнений и позволяет сократить пребывание
больных в стационаре на 15-20% (заключение Министерства здравоохранения
Республики Узбекистан 8Н-3/44 от 10.02.2016 г.).
Апробация результатов исследования.
Результаты данного исследова
ния были обсуждены 6 научно-практических конфренциях, в том числе, на 4
международных и 2 республиканских научно-практических конференциях.
Публикация результатов исследования.
По теме диссертации опубли
ковано 26 научных работ, из них 15 статей, в том числе 13 в республиканских
и 2 в зарубежных журналах, рекомедованных Высшей аттестационной ко
миссией Республики Узбекистан для публикации основных научных резуль
татов докторской диссертации.
Структура и объём диссертации.
Диссертация состоит из введения,
шести глав, заключения, списка использованной литературы, приложений.
Объем диссертации составляет 179 страниц.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ
Во введении
обоснована актуальность и востребованность проведенно
го исследования, цель и задачи исследования, характеристика объектов и
предмета исследования, показано соответствие исследования приоритетным
направлениям развития науки и технологий республики, раскрыты научная
новизна и практическая значимость результатов исследования, приведены
сведения по внедрению результатов исследования в практику, опубликован
ным работам и структуре диссертации.
В первой главе диссертации
«Современные представления о меха
низме канцерогенеза, концепции гепатоканцерогенеза и гемобластозов»
содержится анализ научной информации по рассматриваемой проблеме. В
частности, проанализированы молекулярные механизмы канцерогенеза, рас
смотрена распространенность гепатоцеллюлюрного рака и гемобластозов,
классификация, факторы риска, диагностика, а также определены нерешен
ные или требующие уточнения аспекты этой проблемы.
Во второй главе диссертации
«Сравнительная оценка гепатоканцеро
генеза и гемобластозов: методология изучения патогенеза и эксперимен
тальной терапии рекомбинантным интерлейкином-2»
приводится описа
ние материалов и методов исследования. Работа проведена в эксперимен
тальной лаборатории НИИГиПК на 400 крысах-самцах с исходной массой
тела 100-120 г. Эксперименты проведены в 2 сериях: на моделях гепатокан
церогенеза и лейкемии.
В первой серии опытов для индукции гепатоканцерогенеза у 180 крыс
использована модель Евграфова (1966) с применением специфического гепа
токанцерогена ДЭНА (введение внутрижелудочно зондом 5 раз в неделю в
33
дозе 10 мг/кг массы тела в течение 2 месяцев). К заключительному сроку
введения погибли от острой токсичности 46 крыс (25,5%). Контрольную
группу составили 20 интактных крыс, содержавшихся в тех же условиях в
течение всего эксперимента. Животных забивали через 3, 4, 5, 6, 7 и 8 меся
цев от начала эксперимента. О развитии гепатокарциномы судили по данным
морфологических исследований печени. 134 крысы гепатокарциномой разде
лили на 4 группы:1-я - 35 крыс с гепатоканцерогенезом, получавших физио
логический раствор по 0,5 мл/100 г; 2-я –33 крысы, получавших доксоруби
цин по 0,006 мг/кг внутрибрюшинно 3 дня (Doxorubicin, фирмы
«Pharmitalia») (Пулатов Д.А., 2004); 3-я - 33 крысы, получавших ронколейкин
в 0,006 мг/кг в/б, 3 раза в течение 10 дней (фирма «Биотех», Санкт Петербург)
(Бережная М.Н. и др., 1992); 4-я- 33 крысы, получавших доксору
бицин+ронколейкин в тех же дозах: этапно по 10 дней в течение 3 месяцев.
Во второй серии для воспроизведения лейкемии 180 крысам-самцам
подкожно вводили 40% масляный раствор бензола (0,01 мл/100 г массы тела)
в течение 8 месяцев по предложенному нами методу (Каримов Х.Я. и др.,
2010). Особенностью предложенного метода является использование малых
доз токсиканта в течение длительного времени, что позволило повысить ве
роятность развития лейкемии у экспериментальных животных при снижении
общей токсичности бензола. К концу 5-го месяца введения бензола погибли
от острой токсичности 54 крысы (30%). Контрольную группу составили 20
интактных крыс, содержавшихся в тех же условиях в течение всего экспери
мента. Животных забивали через 3, 4, 5, 6, 7 и 8 месяцев от начала экспери
мента. О развитии лейкемии судили по данным гемограммы и миелограммы
бедренной кости животных. Для исследований брали животных с признаками
лейкемии по картине костного мозга и периферической крови, (126 живот
ных), которых разделили на 4 группы:1-я - 33 крысы с лейкемией, получав
ших физиологический раствор по 0,5 мл/100 г; 2-я - 31 крысы, получавших
гидреа (гидроксимочевина, гидроксикарбамид, Hydrea) по 20 мг/кг внутри
брюшинно (Абдулкадыров К.М., 2004); 3-я -31 крысы, получавших ронко
лейкин в 0,006 мг/кг в/б, 3 раза в течение 10 дней (фирма «Биотех», Санкт
Петербург) (Бережная М.Н. и др., 1992); 4-я-31 крысы, получавших
гидреа+ронколейкин в тех же дозах. Лечение проводили этапно по 10 дней в
течение 3 месяцев.
В соответствующие сроки исследования животных забивали под легким
эфирным наркозом декапитацией в холодной комнате, вскрывали брюшную
полость, быстро извлекали из нее печень, взвешивали, промывали в среде
выделения, состоящей из 0,05 мл раствора трис-НСl-буфера, рН 7,2; 1/3 часть
печени брали для биохимических исследований, остальную – для цитохими
ческого определения НАДФН-диафоразы (Гоженко А.И. и др., 2000) и мор
фологического исследования. В сыворотке крови животных 1 и 2 серии опре
деляли содержание начального L-аргинина и конечного продукта оксида азо
та – (NO
2
) (Комарин А.С. и др., 2005), активность ферментов АлАТ, АсАТ и
щелочной фосфатазы; содержание общего белка и альбуминов. Содержание
интерлейкинов
(
ИЛ-1β, ИЛ6 и ФНО α) определяли иммуноферментным ме-
34
тодом. В крови и гомогенате печени определяли активность ферментов анти
окcидантной защиты: супероксиддисмутазы СОД (Мхитарян В.Г. и др.,
1978), каталазы (Коралюк М.А. и др., 1988), продукта ПОЛ – малонового
диальдегида (МДА) (Андреева Л.И., и др., 1989). Исследовали также гемато
логические показатели крови и костного мозга, аспирированного из головки
бедренной кости. Полученные данные статистически обработаны с примене
нием пакета прикладных программ статистического анализа Microsoft Office
Excel-2010 согласно указаниям по статистической обработке данных клини
ческих и лабораторных исследований.
В третьей главе диссертации
«Структурно-функциональные особен
ности печени при ДЭНА-индуцированном канцерогенезе»
представлены
результаты исследования структурно-функциональных особенностей печени
при ДЭНА-индуцированном канцерогенезе. Длительное введение ДЭНА
приводит к гепатокарциноме; выраженное еѐ развитие наблюдалось через 5 и
6 месяцев от начала эксперимента.
Через 3-4 месяца выявлены изменения ядерного аппарата гепатоцитов,
нарушение трабекулярной структуры, наличие многоядерных клеток, ги
перхромия, что соответствовало стадиям инициации и промоции. На некото
рых участках сохранена архитектоника печени, в цитоплазме выявлены
участки, окрашенные в бледные тона, выявлено неравномерное расширение
межбалочного пространства, дискомплексированность и деформация пече
ночных балок, количество гранул формазана в этих участках значительно
увеличилось и они выявлялись во всех морфофункциональных зонах ткани
печени (рис.1).
Рис. 1. Увеличение содержания гранул формазана в цитоплазме
дисплазированных гепатоцитов при канцерогенезе ДЭНА. Окраска:
НАДФ-диафораза. Ув: ок.10, об.90
35
Уровень L-аргинина в сыворотке крови во все сроки исследований был
снижен в 1.2-1,44 раза по отношению к значениям интактных животных
(табл. 1), что свидетельствовало об усиленном использовании его в качестве
субстрата, тогда как уровень конечных продукт оксида азота – NO
2
и ООNO
-
в
сыворотке крови возрос. Это привело к повышению уровня МДА как в
плазме крови, так и, особенно, в гомогенате печени (на 52,4%) эксперимен
тальных животных. При этом, если в крови интенсификация ПОЛ была свя
зана с ингибированием СОД и КАТ, то впечени ПОЛ протекало с одновре
менным возрастанием активности СОД на фоне снижения КАТ. Несмотря на
активацию СОД в печени, она не способна обезвреживать свободные радика
лы, так как соотношение СОД к МДА сохранялось низким.
Таблица 1
Динамика изменения содержания L-аргинина, NО
2
и ООNO
в сыворотке
крови экспериментальных животных, M±m
Срок
исследова
ния, мес.
Уровень
L-аргинина,
моль/л
Содержание
NO
2
, мкмоль/л
Содержание
OONO
-
,
мкмоль/мл
Через 3
0,090±0,001***
11,64±0,076***
0,12±0,01
0,130±0,001
9,06±0,033
0,15±0,02
Через 4
0,071±0,005***
13,97±0,024***
0,37±0,04**
0,129±0,001
9,15±0,011
0,20±0,02
Через 5
0,068±0,001***
12,90±0,030***
0,56±0,01***
0,131±0,001
9,13±0,009
0,12±0,01
Через 6
0,133±0,002**
9,03±0,025***
0,74±0,03***
0,125±0,002
9,18±0,015
0,16±0,01
Через 7
0,108±0,001***
12,26±0,025***
0,17±0,01**
0,127±0,002
9,24±0,015
0,12±0,01
Через 8
0,112±0,001***
12,91 ±0,03 1***
0,05±0,01***
0,126±0,001
9,25±0,011
0,14±0,01
Примечание: 1. В числителе представлены значения опытной группы, в знаменателе –
интактной. 2. * - различия относительно данных интактной группы зна
чимы (** - P<0,01, *** - P<0,001).
Через 4 месяца в сосудах печени выявлялись белковые массы, отмеча
лась стертость трабекулярного расположения гепатоцитов, выраженный по
лиморфизм клеток, наличие слабой стромы в виде тонкого слоя фиброзной
ткани и активация процессов васкуляризации. В препаратах просматривались
опухолеподобные клетки, многочисленные кистозные полости со стенкой,
выстланной кубическим эпителием, сформировывались структуроподобные
кистоаденомакарциномы. Уровень L-аргинина еще больше снижался, а опре-
36
деление НАДФН-диафоразы показало интенсивное скопление гранул форма
зана в зонах ткани печени с выраженными дистрофическими изменениями. В
сыворотке крови еще больше возрастало содержание NО
2
, отмечена также
более выраженная интенсификация ПОЛ, причем, если в плазме крови
уровень МДА возрастал на 105%, то в гомогенате печени - на 77,2%. Такая
интенсификация ПОЛ проявлялась на фоне прогрессивного снижения актив
ности ферментов антиоксидантной защиты, особенно в крови. На наш взгляд,
в этих процессах важное значение имело непрямое действие реакционно
способных метаболитов NО. Они усиливали образование нитрозаминов, яв
ляющихся сами по себе канцерогенными соединениями. Развивающиеся из
менения основания ДНК, разрывы в цепях ДНК и ингибирование процессов
репарации поврежденного ДНК усиливали промоцию гепатоканцерогенеза,
способствуя ещѐ большей активизации неопластического перерождения кле
ток. Усиленное образование метаболитов NО приводило к изменению эндо
телия сосудов, ускорению неоангиогенеза, адгезии опухолеперерожденных
клеток к эндотелию, что подтверждалось скоплением гранул формазана во
круг поврежденных клеток и васкуляризацией гепатоцитов. К 5-му месяцу
эксперимента в печени животных выявлено большое ко личество мелких и
крупных серо-коричневого цвета гранул формазана, скоп ление которых
наблюдалось в зонах печени с выраженными дистрофически ми изменениями
и вокруг очагов вакуолизированных клеток. Характерным для данного
периода являлось также наличие признаков гепатоцеллюлярной карциномы,
соответствующих картине умеренно дифференцированной опу холевой ткани.
Цитоплазма клеток неоднородна, ядра с признаками поли морфизма и
гипертрофированными нуклеосомами. Местами отмечались раз рывы
ядерной оболочки, признаки исчезновения ядер и кариорексис. В этот период
наблюдалось постепенное снижение степени гиперлипопероксидации
плазмы крови на фоне нарастания ПОЛ в гепатоцитах. Такое разнонаправ
ленное действие ПОЛ в этот период, видимо, связано с резким увеличением
продукции пероксинитрита в гепатоцитах. С другой стороны, такая гиперак
тивация проявлялась компенсаторным повышением активности СОД на фоне
снижения еѐ активности в крови. Несмотря на такую активацию фермента,
повреждающее действие продуктов ПОЛ в печени сохранялось, вследствие
дисбаланса в системе ПОЛ-АОЗ.
Наиболее интересные результаты отмечены в период наибольшего про
грессирования неопластического процесса (через 6 месяцев). Для данного
периода было характерным повышение уровня L-аргинина до значения ин
тактных животных, снижение образования NO
2
, некоторое ингибирование
NO-системы. Гистохимическими исследованиями отмечено неравномерное
окрашивание различной величины гранул диформазана. Гранулы диформаза
на в паренхиме печени менее выражены и выявлялись лишь местами. Это
подтверждалось выявлением в гистологических срезах множественных зло
качественных клеток с обширными участками скопления голых ядер, форми
рующими пласты с наличием внутри- и внеклеточного фермента. Этому спо
собствовало также снижение активности ферментов АлАТ, АсАТ по сравне-
37
нию с показателями предыдущего срока на фоне резкого ингибирования бе
локсинтезирующей функции печени. Уменьшилась степень гиперлипоперок
сидации на фоне сохранения высокой активности СОД и КАТ в гомогенате
печени, продолжающегося угнетения СОД в крови. Одним из механизмов
повышения активности ферментов антиоксидантной защиты в гомогенате
печени является, на наш взгляд, компенсаторная активация их в нормально
сохраненных гепатоцитах.
По мере увеличения опухолевой массы и начала метастазирования,
вновь возрастала роль NO в опухолевом процессе. Видимо, с этим было свя
зано постепенное увеличение в сыворотке крови NO
2
на фоне уменьшения
содержания L-аргинина. Цитохимически в эти периоды (через 7 и 8 месяцев)
выявились стромальные элементы с интенсивным окрашиванием за счет
нарастания содержания гранул формазана, причем, в основном они были
сконцентрированы по периферии клеток, сливаясь в участки темно-серого и
темно-коричневого цвета. Морфологически через 7 и 8 месяцев выявлялась
отчетливая картина гепатоцеллюлярной карциномы и гиперваскуляризация
паренхимы печени. Имея в виду дезагрегационное действие NO, можно ска
зать, что, усиленный синтез NO подавлял межклеточное сцепление клеток,
способствуя выходу клеток в сосуды и облегчая распространение опухоле вых
клеток по организму с током крови. О выраженных изменениях в струк туре
печени свидетельствовало и прогрессирующее снижение содержания
альбумина и общего белка, причем, это проявлялось на фоне снижения про
цессов липопероксидации как в ткани печени, так и в плазме крови, видимо,
вследствие резкого снижения субстратов ПОЛ. В эти периоды наблюдалась
деградация ферментных систем антиоксидантной защиты.
При развитии неопластических процессов уровень цитокинов ИЛ-1β,
ИЛ-6 и ФНО-α резко возрастал по мере прогрессирования опухолевого про
цесса (табл. 2).
Таблица 2
Содержание цитокинов (пг/мл) в сыворотке крови крыс с ДЭНА
индуцированным канцерогенезом, M±m
Группа и срок
исследования
ИЛ-1β
ИЛ-6
ФНО-α
Интактная
1,41±0,05
1,54±0,05
2,91±0,06
Опытные:
через 3 мес
5,84±0,18***
3,44±0,24***
4,23±0,21***
через 4 мес
6,58±0,31***
4,27±0,19***
5,44±0,31***
через 5 мес
6,97±0,48***
4,98±0,23***
5,22±0,42***
через 6 мес
7,42±0,52***
5,66±0,34***
6.83±0,33***
через 7 мес
6,33±0,71***
7,34±0,37***
8.47±0,28***
через 8 мес
6,24±0,58***
8, 11±0,42***
10,01±0,32***
Примечание: ***- различия относительно данных интактной группы значимы (
P<0,001).
38
Таким образом, проведенные исследования показали важную роль окси
да азота в развитии гепатоканцерогенеза. Значение данного метаболита зави
село от стадии патологического процесса, проявляясь выраженной активаци
ей в периоды инициации и промоции, снижением в период прогрессирования
опухолевого процесса и вновь активацией в стадии метастазирования опухо
левых клеток. Соответственно этому повышался уровень цитокинов. В
четвертой главе диссертации
«Особенности развития хронической
лейкемии при бензольной интоксикации»
представлены биохимические
механизмы развития лейкемии. Проведенные исследования показали, что под
воздействием бензола в клетках костного мозга нарушаются процессы диф
ференцировки и пролиферации. Так, через 4 месяца от начала введения ток
сиканта у 11,1% крыс было отмечено развитие гипоплазии костного мозга, у
50% -лейкемоидная реакция. К заключительному сроку эксперимента (через
8 месяцев) у животных начинали преобладать лимфо- и миелопролифератив
ные процессы, выявляясь у 59,1 и 27,3% животных. Это проявлялось про
грессивным ухудшением состояния животных, наблюдалась адинамия, поте
ря массы тела, геморрагии, а при вскрытии отмечалась гепатоспленомегалия.
Сдвиги в гематологических показателях соответствовали типам нарушений
костномозгового кроветворения и проявлялись при гипоплазии развитием 3-
ростковой панцитопенией – эритро-, лейко- и тромбоцитопенией. В пунктате
костного мозга отмечена гипоклеточность с уменьшением количества грану
лоцитарных клеток; при этом выявлялся относительный лимфоцитоз. На ос
новании полученных данных можно сделать следующее заключение: дли
тельное введение малых доз бензола приводит к нарушению кроветворения в
клетках костного мозга крыс, выраженность которого зависит от длительно
сти введения токсиканта.
Для выяснения роли оксида азота в динамике лейкемии нами было изу чено
содержание конечного продукта оксида азота –NО
2
и его связь с уров
нем
пероксинитрита и L-аргинина в сыворотке крови экспериментальных
животных. Установлены значительные изменения в уровне NО
2
в сыворотке
крови, выраженность и направленность которых зависела от срока экспери
мента: повышение на 3-6 месяцы, нормализация через 6-7 месяцев и сниже
ние в стадии выраженного бластомогенеза (табл. 3). Уровень ООNО
-
был
снижен в период промоции канцерогенеза, резко возрастал в период индук
ции и прогрессивно уменьшался в период прогрессирования и метастазиро
вания опухолевого процесса. Лишь преобладание выработки NO над процес
сами ПОЛ через 7 и 8 месяцев от начала эксперимента характерного, видимо,
для стадии прогрессии и метастазирования (через 8 месяцев), обусловливало
интенсивное размножение опухолевых клеток и расселение их в другие орга
ны и системы. Соответственно этому изменялся и уровень аргинина: в ран
ние сроки выявлено его резкое снижение, через 6 месяцев – тенденция к нор
мализации и вновь снижение в последующие сроки. В процессе развития
лейкозогенеза активность СОД эритроцитов прогрессивно снижалась, что
способствовало интенсификации ПОЛ в ранние сроки и резкому угнетению
39
всех биохимических процессов в более поздние. Активность каталазы крови
прогрессивно снижалась по мере прогрессирования опухолевого процесса.
Исследование содержания цитокинов ИЛ-1β, ИЛ-6 и ФНО-α в сыворотке
крови крыс с бензольной интоксикацией показало прогрессивное увеличе
ниеИЛ-1β и ИЛ-6 (табл. 4) в течение всего эксперимента. Содержание ФНО-α
в сыворотке крови крыс с хронической бензольной интоксикацией через 3-4
месяца статистически значимо возрастало(в 1,83 и 2,14 раза, соответственно).
К концу 5-ого месяца уровень ФНО-α начал постепенно снижаться, все еще
превышая нормативные значения в 1,42 раза(Р<0,05). Такая направленность
изменений сохранялась и в дальнейшем. В последующие сроки мы наблюда
ли прогрессивное снижение уровня ФНО-α в: 1,5 (Р<0,05) и 2,82 (Р<0,001)
раза, соответственно, через 7 и 8 месяцев от начала эксперимента.
Таблица 3
Динамика изменения содержания L-аргинина, NO
2
и ООNО
-
в сыворотке
крови экспериментальных животных, M±m
Срок
исследова
ния, мес.
Уровень L
аргинина, моль/л
Содержание
NO
2
,мкмоль/л
Содержание
ООNО
-
мкмоль/м
л
через 3
0,090±0,001***
13,75±0,08***
0,11±0,01
0,130±0,001
9,06±0,03
0,15±0,02
через 4
0,081±0,005***
14,39±0,04***
0,43±0,03***
0,129±0,001
9,15±0,07
0,20±0,02
через 5
0,065±0,004***
15,29±0,03***
0,65±0,03***
0,131±0,001
9,13±0,09
0,12±0,01
через 6
0,103±0,003***
10,31±0,05***
0,47±0,03***
0,125±0,002
9,18±0,05
0,16±0,01
через 7
0,098±0,001***
9,22±0,07
0,21±0,01***
0,127±0,002
9,24±0,05
0,12±0,01
через 8
0,081±0,002***
8,12±0,03***
0,06±0,01***
0,126±0,001
9,25±0,08
0,14±0,01
Примечание: 1. В числителе представлены значения опытной группы, в знаменателе —
интактной. 2.*** - различия относительно данных контрольной груп пы
значимы (P<0,001).
Таким образом, длительное введение малых доз бензола приводило к
нарушению кроветворения в клетках костного мозга крыс, выраженность ко
торого зависела от длительности введения токсиканта. Если в ранние сроки в
основном выявлена лейкемоидная реакция, то к концу 5 месяца у 1/3 крыс
40
развивалась лейкемия, а через 8 месяцев число животных с лейкемией воз
растало до 86,4%.
Таблица 4
Содержание цитокинов (пг/л) в сыворотке крови крыс с хронической
интоксикацией бензолом, M±m
Группа, срок
исследо вания
ИЛ-1β
ИЛ-6
ФНО-α
Интактная
1,41±0,05
1,54±0,05
2,91±0,06
Опытные:
через 3 мес.
6,12±0,18***
4,42±0,24***
5,33±0,21***
через 4 мес.
6,81±0,31***
5,15±0,19***
6,22±0,31***
через 5 мес.
7,95±0,48***
5,96±0,23***
4,12±0,42*
через 6 мес.
4,74±0,22***
5,28±0,31***
4,68±0,28***
через 7 мес.
4,63±0,27***
7,73±0,33***
6,84±0,32***
через 8 мес.
5,62±0,31***
6,81±0,34***
7,10±0,43***
Примечание: * - различия относительно данных интактной группы значимы (* -
P<0,05, *** - P<0,001).
В пятой главе диссертации
«Влияние различных видов фармакотера
пии на структурно-функциональные параметры печени при гепатокан
церогенезе»
представлены результаты лечения гепатоканцерогенеза. Основ
ным химическим препаратом, используемым для лечения опухолей является
доксорубицин – противоопухолевой антибиотик группы антрациклинов. При
фармакотерапии ДЭНА-индуцированного гепатоканцерогенеза доксоруби
цином нами выявлено сохранение некоторых патоморфологических призна
ков опухолевого перерождения гепатоцитов: ткань печени имела полиморф
ный вид, с атипично расположенными структурными элементами, как парен
химы, так и стромы. Ярда их были сдвинуты к периферии клетки, имели по
лиморфное строение с гиперхромазией хроматина. В отдельных группах ати
пических гепатоцитов содержались гранулы формазана в виде пылевидного
скопления вокруг клеточных мембран. Из-за дистрофических и деструктив
ных изменений гепатоцитов морфометрически определялось значительное
уменьшение содержания гранул формазана (до 26,5%) в цитоплазме, а выра
женность их зависела от степени деструкции. Между скоплениями атипич
ных гепатоцитов выявлялись массивные скопления лимфо-гистиоцитарных
клеток, в них гранулы формазана определялись лишь в цитоплазме макро
фагов.
Учитывая, что химиотерапия доксорубицином способствовала сниже
нию выработки ИЛ-2, мы решили включить в комплекс лечения ронколей
кин. Лечение ДЭНА-индуцированной опухоли печени комбинацией доксору
бицина с ронколейкином показало более значительный эффект в виде норма-
41
лизации строения, формы и расположения гепатоцитов. Вокруг канцерогенно
перерожденных клеток определялись небольшие скопления мононуклеарных
клеток из лимфоцитов, макрофагов и юных соединительнотканных клеток.
Ядерные структуры гепатоцитов имели относительно равномерные формы и
величины, но с выраженной концентрацией хроматина, признаками митоза и
амитоза. При гистохимическом определении маркера НАДФ-диафоразы в
паренхиме печени или в цитоплазме гепатоцитов отмечалось неравномерное
расположение значительного количества мелких, иногда средних гранул
формазана. Скопление гранул формазана определялось и в межклеточном
веществе в виде серо-фиолетовых полос.
Применение доксорубицина не оказывало заметного влияния на уровень
нитритов в сыворотке крови крыс, тогда как применение его совместно с
ронколейкином повышало содержание нитритов по мере удлинения продол
жительности лечения. Наряду с этим отмечена тенденция к увеличению со
держания L-аргинина через 6 месяцев от начала эксперимента, а в дальней
шем мы наблюдали постепенное снижение содержания L-аргинина. В то же
время при фармакотерапии доксорубицином отмечено некоторое увеличение
уровня L-аргинина относительно значений нелеченной группы крыс во все
сроки исследования. Включение в него ронколейкина приводило к усилен
ному использованию субстрата синтазой оксида азота. Причем, содержание
L-аргинина было статистически достоверно ниже показателей группы жи
вотных, получавших только химиопрепарат. Это проявлялось во все сроки
исследования и, видимо было направлено на обезвреживание образующихся
опухолевых клеток, что подтверждалось морфологическими исследованиями,
подтверждающими замедление прогрессирования опухолевого процесса.
Определение содержания МДА в крови экспериментальных животных
показало, что через 6 месяцев от начала опыта отмечается некоторое превы
шение нормативных значений - на 19,3% (Р<0,05). По истечении 7-го месяца
уровень ПОЛ приближался к значениям интактных животных, а концу опыта
был снижен 42% (Р<0,05). Фармакотерапия доксорубицином достоверно по
вышала уровень МДА в сыворотке крови крыс по сравнению с показателями
нелеченной группы животных. Еще большее увеличение мы наблюдали при
включении в комплекс лечения ронколейкина. Причем, это увеличение сов
падало с повышением уровня оксида азота и снижением содержания L
аргинина. Видимо, у данной группы животных отмечалось повышенное об
разование пероксинитрита, оказывающего повреждающее действие на опу
холевые клетки.
Этапная химиотерапия доксорубицином на фоне снижения относитель
ной массы опухоли приводила к дисбалансу в иммунной системе. Содержа
ние общих лимфоцитов и Т-лимфоцитов на первом этапе лечения имело тен
денцию к увеличению, а в последующем значительно снижалось. Уровень
СD4+ существенно не отличалсяот значений нелеченной группы животных, а
содержание СD8+ достоверно снижалось. Доксорубицин и ронколейкин при
их совместном применении стимулировали специфическую и неспецифиче
скую иммунную защиту, что совпадало со снижением относительной массы
42
опухоли. Этапная химиотерапия доксорубицином способствовала снижению
по сравнению с нелеченными животными уровня ФНО-α до 3,66±0,16 пг/мл
(Р
1
<0,001) и еще большему снижению уровня ИЛ-1β - до 3,05±0,13 пг/мл
(Р
1
<0,001). При совместном применении доксорубицина и ронколейкина
уровень ФНО-α и ИЛ-1β составил соответственно 7,29±0,43 и 13,25±0,79
пг/мл т.е. показатели были в 2-4 раза выше, чем у животных предыдущий
группы (Р
1
<0,001 и Р
2
<0,001). Таким образом, препарат стимулировал проти
воопухолевое действие доксорубицина, что в конечном итоге проявлялось
снижением летальности животных этой группы и замедлением прогрессиро
вания гепатоканцерогенеза.
В шестой главе диссертации
«Влияние различных видов фармакоте
рапии хронической лейкемии на биохимические показатели»
представ
лены результаты лечения экспериментальной лейкемии. Фармакотерапия
лейкемии гидреа приводила к заметному уменьшению трансформированных
клеток как в костном мозге, так и в периферической крови. Однако препарат
обладал выраженным общетоксическим действием, способствуя усугубле
нию анемического и геморрагического синдромов. Наряду с этим, отмечено
повышение содержания L-аргинина относительно показателей нелеченной
группы животных на 49,5; 34,7 и 71,6%, соответственно срокам 6, 7 и 8 меся
цев от начала опыта. Такие изменения протекали на фоне снижения в 1,31 ра
за уровня конечных продуктов оксида азота относительно значений нелечен
ной группы на первом этапе лечения. Уровень оксида азота в дальнейшем
постепенно возрастал и к заключительному сроку статистически значимо
превышал показатели 1-й группы крыс в 1,22 раза (Р<0,05). Содержание пе
роксинитрита при лечении лейкемии гидреа возрастало в 1,23-3,83 (Р<0,001)
раза, что было связано с усиленным распадом опухолевых клеток под дей
ствием препарата. Это способствовало резкой активизации процессов ПОЛ в
сыворотке крови экспериментальных животных, так как уровень МДА в сы
воротке крови статистически значимо возрастал в 1,24 (Р<0,05); 1,52 (Р<0,05)
и 2,1 (Р<0,01) раза на первом, втором и третьем этапах лечения относительно
значений нелеченной группы крыс и превышал значения интактных крыс.
Выявленные изменения протекали на фоне еще большего ингибирования ак
тивности СОД и каталазы. Фармакотерапия лейкемии гидреа статистически
значимо снижала высокий уровень ИЛ-1β и ИЛ-6 в 1,14-1,42 раза, не оказы
вая заметного влияния на содержание ФНО-α на первом этапе лечения. На
втором и третьем этапах фармакотерапии уровень цитокинов продолжал
снижаться по сравнению с показателями нелеченной группы, но все еще пре
вышал показатели интактных крыс.
Комбинированная фармакотерапия лейкемии гидреа с ронколейкином
заметно снижала токсическое влияние гидреа на гематологические показате
ли. В крови в 1,5-2 раза снижалось содержание лейкоцитов, миелобласты не
выявлялись, число миелоцитов снижалось в среднем в 3 раза, а метамиелоци
тов – в 1,5-2,6 раза, уменьшалась эозинофильно-базофильная ассоциация. В
клетках костного мозга было отмечено снижение выраженности трехростко
вой панцитопении. Вместе с тем, комплексная фармакотерапия гидреа с рон-
43
колейкином повышала содержание L-аргинина в сыворотке крови крыс на
всех этапах. Это проявлялось на фоне повышения содержания нитритов и
нитратов в сыворотке крови крыс данной группы в 1,23; 1,22 и 1,31 (Р<0,05)
раза на первом, втором и третьем этапах лечения относительно значений 1, 2
и 3 групп крыс. Отмечено снижение показателей пероксинитрита относи
тельно показателей крыс, леченных только гидреа, во все сроки исследова
ния. Выявленные сдвиги в системе оксида азота способствовали активизации
процессов ПОЛ в сыворотке крови экспериментальных животных, так как
уровень МДА в сыворотке крови статистически значимо возрастал относи
тельно значений нелеченной группы крыс и был ниже показателей группы
животных, получавших только гидреа. Активность СОД и каталазы возраста
ла, т.е. включение в комплекс лечебных мероприятий лейкемии ронколейки на
способствовало некоторому восстановлению баланса в этой системе,
вследствие активизации ферментов АОЗ.
Механизм положительного действия ронколейкина связан с активизаци
ей цитолитической способности натуральных киллеров и цитотоксических Т
лимфоцитов, образованием лимфокинактивированных киллеров и опухоль
инфильтрирующих клеток, обеспечивающих иммунную защиту, направлен
ную против опухолевых клеток, что подтверждалось снижением высокого
уровня ИЛ-1β, ИЛ-6 и ФНО-α во все сроки исследования. Несмотря на такие
положительные сдвиги, содержания цитокинов сохранялось статистически
значимо более высоким относительно значений интактных крыс. Выявлен
ные нами положительные сдвиги были, видимо, связаны с индукцией реком
бинантным ИЛ-2 апоптоза, вследствие повышения уровня проапоптотиче
ского белка Bad и снижения содержания антиапоптотических белков Bcl-2 и
Bcl-x1. В наших экспериментах препарат стимулировал противоопухолевое
действие гидреа, что проявлялось снижением летальности животных этой
группы и замедлением прогрессирования лейкозогенеза.
Резюмируя результаты исследований данной серии, следует сказать, что
лечение индуцированного гепатоканцерогенеза и лейкемии различными
препаратами показало, что наиболее позитивные результаты были получены
при применении комбинации цитостатиков с ронколейкином.
ВЫВОДЫ
На основе проведенных исследований по докторской диссертации на
тему
«
Сравнительное изучение гепатоканцерогенеза и гемобластозов: пато
генез и экспериментальная терапия рекомбинантным интерлейкином 2» мо
гут быть сделаны следующие выводы:
1. В ранние сроки гепатоканцерогенеза выявляются гипертрофирован
ные многоядерные клетки с бледно-окрашенной цитоплазмой и признаками
клеточного атипизма. Очаги гепатоцеллюлярного рака развивались через 5
месяцев; к концу эксперимента выявлены явные признаки озлокачествления с
разрастанием очагов гепатоцеллюлярной карциномы и гиперваскуляриза ции
паренхимы.
44
2. В ранние сроки введения в организм экспериментальных животных
малых доз бензола в основном выявляются признаки лейкемоидной реакции;
к концу 5 месяца у 1/3 крыс развиваются признаки хронического миело- (по
вышение миелобластов в клетках костного мозга и периферической крови) и
лимфопролиферативного (увеличение количества лимфобластов) процессов,
а через 8 месяцев число животных с лейкемией возрастало до 86,4%.
3. Через 3 и 4 месяца от начала введения ДЭНА или бензола в организм
животных наблюдалось снижение L-аргинина и повышение NО
2
как фон для
обеспечения процессов инициации, через 5-7 месяцев наблюдается уменьше
ние первого и увеличение второго показателя, что направлено на прогресси
рование неопластических процессов (особенно при ДЭНА-канцерогенезе); к
концу эксперимента как фон для усиления ангиогенеза и метастазирования в
обеих моделях эксперимента вновь отмечается активация системы L
аргинин-окись азота.
4. При ДЭНА-индуцированном канцерогенезе через 3-4 мес. установле
но прогрессирующее повышение уровня МДА в плазме, через 3-5 мес. - в го
могенате печени, что связано с инициированием неопластического процесса.
В дальнейшем уровень МДА постепенно снижался, особенно, к концу экспе
римента, вследствие формирования крупных очагов опухолей. Такая же
направленность изменений отмечена и в сыворотке крови крыс с индуциро
ванной лейкемией, однако она носила несколько менее выраженный харак
тер.
5. В процессе развития гепатоканцерогенеза активность СОД в гомоге
нате печени возрастала через 3, несколько снижалась через 4, резко активи
зировалась через 5 и 6 месяцев и существенно ингибировалась в дальнейшем.
В эритроцитах крови она была угнетена во все сроки и степень еѐ выражен
ности совпадала с прогрессированием опухолевого процесса. При хрониче
ской бензольной интоксикации активность ферментов антиоксидантной за
щиты в крови постепенно снижалась по мере прогрессирования миело- и
лимфопролиферативных процессов.
6. В динамике гепатоканцерогенеза и хронической лейкемии уровень
цитокинов ИЛ-1β и ИЛ-6 возрастал по мере прогрессирования опухолевого
процесса. Более выраженно экспрессировался синтез ИЛ-1β. Содержание
ФНО-α повышалось до 6 месяцев, а затем прогрессивно снижалось.
Наибольшие изменения в содержании цитокинов в сыворотке крови экспе
риментальных животных отмечены при миело- и лимфопролиферативных
процессах.
7. Результаты лечения индуцированной опухоли печени показали, что
наиболее позитивные морфологические изменения в ткани печени экспери
ментальных животных выявлялись под действием комбинации доксорубици
на с ронколейкином. В атипичных гепатоцитах гранулы формазана выявля
лись лишь в виде пылевидного скопления, свидетельствуя о замедлении про
грессирования гепатоканцерогенеза.
8. Цитостатики, особенно в сочетании с ронколейкином, приводили к
стабилизации системы L-аргинин-оксид азота, усилению окислительных и
45
антиокислительных процессов в системе ПОЛ-АОЗ при гепатоканцерогенезе
и хронической лейкемии, способствуя цитотоксической гибели мутантных
клеток и замедлению прогрессирования опухолевого процесса.
9. Фармакотерапия опухолей доксорубицином при гепатоканцерогенезе
и гидреа при лейкемиях увеличивала содержание цитокинов относительно
нелеченной группы, комбинация их с ронколейкином – несколько снижала
содержание цитокинов, обусловливая активизацию противоопухолевой им
мунной защиты. Наибольшие изменения отмечены при ДЭНА-канцерогенезе.
46
SCIENTIFIC COUNCIL DSс.27.06.2017.Tib.30.03 ON AWARD
OF SCIENTIFIC DEGREE OF DOCTOR OF SCIENCES AT
TASHKENT MEDICAL ACADEMY
SCIENTIFIC-RESAERCH INSTITUTE OF HEMATOLOGY
AND BLOOD TRANSFUSION
KASIMOVA GULMIRA GAFUROVNA
COMPARATIVE STUDY OF HEPATOCARCINOGENESIS AND
HEMOBLASTOSIS: PATHOGENESIS AND EXPERIMENTAL
THERAPY RECOMBINANT INTERLEUKIN-2
14.00.16 – Normal and pathologic physiology
DISSERTATION ABSTRACT OF DOCTORAL DISSERTATION (DSc)
ON MEDICAL SCIENCES
Tashkent – 2017
47
The theme of doctoral dissertation (DSc) was registered at the Supreme Attestation Commis
sion at the Cabinet of Ministers of the Republic of Uzbekistan under number В2917.1.DSc/Tib9
The doctoral dissertation has been prepared at scientific-resaerch Institute of Hema
tology and Blood Transfusion.
The abstract of the dissertation is posted in three (Uzbek, Russian, English) languages on the web
site of Scientific Council www.tma.uz and on the website of «ZiyoNet» Information and educational por
tal www.ziyonet.uz.
Scientific consultant: Karimov Khamid Yakubovich
Doctor of medical sciences, professor
Official opponents
:
Sabirova Rikhsi Abdukadirovna
Doctor of medical sciences, professor
Zokirov Erkin Uzuevich
Doctor of medical sciences, professor
Pulatov Doniyor Anvarovich
Doctor of medical sciences, professor
Leading organization:
FSAEIHE, The first Moscow State Medical University named after
I.M.Sechenov (Sechenov’s University), Rus
sian Federation)
The defense will take place «___» __________ 2017 ___ at _____ at the meeting of Scientific Council at
the Scientific Council DSc 27.06.2017.Tib.30.03. at the Tashkent Medical Academy (Ad dress: 100109,
Uzbekistan, Tashkent, Farobi street, 2. Phone/fax: (99871) 150-78-25, е-mail: tta2005@mai.ru
Conference h
all of the 1st academic building of the Tashkent Medical Academy
).
The doctoral dissertation can be reviewed at the Information Resource Centre of the Tashkent Med
ical Academy (is registered under № __ ) (Farobi street, 2,Tashkent Medical Academy, Olmazar district,
Tashkent, Uzbekistan 100109, Phone/fax : (+99871)150-78-14).
Abstract of dissertation sent out on «_____»________________2017 year.
(mailing report № _____ on «_____»_____________________2017 year)
G.I. Shaykhova
Chairman of the Doctoral Degree
Awarding Scientific Council,
Doctor of Medical Sciences, professor
N.J. Ermatov
Secretary of the Doctoral Degree
Awarding Scientific Council,
Doctor of Medical Sciences
B.U. Iriskulov
Chairperson of the Scientific
Seminar at the Doctoral Degree
Awarding Scientific Council,
Doctor of Medical Sciences, professor
48
INTRODUCTION (abstract of doctoral dissertation)
The urgency and relevance of the thesis topic.
The World Health Organi
zation (WHO) states that in the world, about 6 million people suffer from malig
nant tumors (MT). Every year, 2 million people die from malignant diseases, the
primary annual incidence of malignant tumors more than 2.5 million cases. Ac
cording to the International Agency for Research on Cancer (IARC), 85% of tu
mors can be associated with adverse external factors.Annually in the world, 1.25
million people die from hepatocellular carcinoma (HCC). Leukemia incidence is
13.2 cases per 100,000 populations. In 60% of cases has been determined disability
and invalidization due to cancer.
The aim of the research:
identifying the specific molecular features of mo
lecular mechanisms of neoplastic degeneration (for example, hepatocarcinogenesis
and leukemia) and finding new and better ways to their treatmeant.
The object of the research
were 400 adult male rats: 180 - with diethil nitra
zolin induced hepatocarcinogenesis DEN; 180 - with the leukemia in introduction
of benzol; 40 - intact animals.
The scientific novelty of the research:
the significance of the level of nitric oxide, the intensification of LPO, the hy
perproduction of cytokines in neoplastic degenerations in the models of hepatocar
cinogenesis and leukemia;
the role of nitric oxide in the development of neoplastic processes has been
proved: the content of L-arginine, the final products of nitric oxide and peroxynite
ritas varies depending on the stage of carcinogenesis, determining the conditions
for progression and metastasis;
the dependence of the expression of hyperlipoperoxidation and the decrease in the
activity of antioxidant protection enzymes in the homogenate of liver and se rum of
experimental animals from the stage of carcinogenesis was established;
proved the expression of cytokines IL-1, IL-6 and TNF-α in carcinogenesis as
the neoplastic process progresses, especially in leukemia;
proved substantiated the inclusion of Roncoleukin in increasing the antitumor
effect of cytostatics in hepatocarcinogenesis and leukemia, reducing the general
toxic effect of doxorubicin and hydrea.
Practical results of the research are as follows:
The use of modern highly informative methods of studying molecular mecha
nisms of hepatocarcinogenesis, and leukemia can increase the level of methodolog
ical research on designated problems;
Elucidation of molecular mechanisms of neoplastic processes allows targeted
approach to cancer therapy; increase the eficiency of pharmacotherapy to reduce
the resistance of tumor cells to chemical praparations.
the use of our proposed model of leukemia in outbred rats by introducing
benzol can increase the reproducibility of leukemia and standardize the assessment
of anti-leukemic action of new drugs;
Results of research have created the preconditions for the practical implemen
tation of roncoleykin in Onco-Hematology and for the treatment of hepatocellular
49
carcinoma.
Implementation of the research results.
On the basis of scientificresearch
study of hepato cancerogenesis and leucosis have been developed the materails for
implementation into the practice:
Have been written methodic recomedation «Experemental models of chronic
leukosis» which introduced into the practice (conclusion of the Ministry of the
Health of the Republic of Uzbekistan 8Н-3/44 from 10.02.2016 y.). These
methodic recommendations allow to determine basic factors leading to the
development of the leucosis, mechanism of their development, ensuring early
detection of the disease.
on the basis of the results obtained during evaluation of efficacy of the ron
coleykin usage in the decreasing of toxic properties of chemotherapeutic prepara
tions, used for the treatment of hepatocellular cancer and leukemia, made methodic
recommendations «Expereimental basis od using roncoleukin in the chemotherapy
of leukosis» (Conclusion of the Ministry of the Health of the Republic of Uzbeki
stan 8Н-3/44 from 10.02.2016 y.)
These methodic recommendations allow defenetily decreasing side affects of
chemo therapeutic preparations, increasing of the treatment efficacy. The results of
the study molecular basis hepatocancerogenesis and leukemia, early diagnostics of
malignant new formations, developing of their treatment with the usage of ronco
likin in the complex of chemo preparations, implemented into practical health, in
par ticular, into the activity of scientific laboratoty of scientific research institute of
he matology and blood transfusion, inter institutional scientific laboratoty of Tash
kent Medical Academy, clinics of the departments of leucosis of scientific re search
institute of hematology and blood transfusion. (Conclusion of the Ministry
of the Health of the Republic of Uzbekistan 8Н-3/44 from 10.02.2016 y.)
Implementation of basic results carried out fundamental study contributes early
diagnostics of the acute leucosis and other malignant new formations, improves
course and prognosis of the disease, life quality of the patients, decreases quantity
of complications and allows to reduce staying of the patients in in-patient
department to 15-20%. (Conclusion of the Ministry of the Health of the Republic
of Uzbekistan 8Н-3/44from 10.02.2016 y.)
The outline of the thesis.
The important role of nitric oxide in the development of hepatocarcinogenesis
is shown: manifested by its pronounced activation during initiation and promotion
periods, a decrease in the progression of the tumor process, and again activation of
tumor cells in the stage of metastasis. Accordingly, the level of cytokines in
creased. The same direction of changes is established and with leukemia, caused
by benzol. Prolonged administration of small doses of benzol led to disruption of
hematopoiesis in bone marrow cells of rats, the severity of which depended on the
duration of administration of the toxicant. If in the early period the leukemoid reac
tion was mainly detected, by the end of the 5 months, 1/3 of the rats developed
leukemia, and after 8 months the number of animals with tumors increased to
86.4%.
In the dynamics of hepatocarcinogenesis and chronic leukemia, the level of
cytokines IL-1β and IL-6 progressively increased as the tumor process progressed.
50
The synthesis of IL-1β was more pronounced. The content of TNF-α increased to 6
months, and then progressively decreased. The greatest changes in the content of
cytokines in the serum of experimental animals were observed in myelo- and lym
phoproliferative processes.
Cytostatics, especially in combination with roncoleukin, helped stabilize the
L-arginine-nitrogen oxide system, enhance oxidative and antioxidative processes in
the POL-AOZ system in hepatocarcinogenesis and chronic leukemia, promoting
cytotoxic death of mutant cells and slowing the progression of the tumor process.
Pharmacotherapy of hepatocarcinogenesis and benzol leukemia with cytostatics in
combination with Roncoleukin induced an antitumor effect of cytostatics, which
was manifested by a decrease in the mortality of animals of this group and slowing
the progression of pathology.
51
ЭЪЛОН ҚИЛИНГАН ИШЛАР РЎЙХАТИ
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ
LIST OF PUBLISHED WORKS
I бўлим (I часть; Ipart)
1. Каримов Х. Я., Касымова Г. Г., Исроилов Р.И. Влияние лактофлора на
активность НАДФН-диафоразы печени при ДЭНА-индуцированном канце
рогенезе //Патология. – Ташкент, 2006. - №3. - С. 11-13.
(14.00.00.24.12.2009.№7).
2. Каримов Х. Я., Касымова Г. Г., Зариббаев У. З., Қурбонова Н. Н.,
Иноятова Ф. Х. Каламушларда лейкознинг бензол моделини яратиш. //
Патология. –Ташкент, 2009. - №3. - 26-31 бет.(14.00.00.24.12.2009. №7).
3. Каримов Х. Я., Зариббаев У. З., Касымова Г. Г. Экспериментал лейкоз
динамикасида жигар ва буйрак монооксигеназ тизими //Вестник
Ташкентской медицинской академии. - Ташкент, 2012. - №2. - С. 21-24.
14.00.13. (14.00.00. №13).
4. Касымова Г. Г. Экспериментал лейкоз ривожланишида ѐғларнинг
перекисли оксидланиш жараѐнлари // Вестник Ташкентской медицинской
академии. - Ташкент, 2012. - №2. - С. 27-30. (14.00.00. №13).
5. Касымова Г. Г. Особенности процессов ПОЛ и активность ферментов
антиоксидантной защиты при гепатоканцерогенезе и лейкозах // Журнал
теоретической и клинической медицины.- Ташкент, 2012.- №7.- С.12-14.
14.00.03. (14.00.00. №3).
6. Каримов Х. Я., Касымова Г. Г. Перекисное окисление липидов и ак
тивность ферментов антиоксидантной защиты в митохондриальной и микро
сомальной фракциях печени лейкозных крыс //Медицинский журнал
Узбекистана. –Ташкент, 2012. - №5. - С. 73-75. 14.00.08. (14.00.00. №8).
7. Karimov H. Ya., Zaribbaev U. Z., Kasymova G. G. Monooxygenaze
system of the liver of rats with experimental leucosis // Вестник Ташкентской
медицинской академии. – Ташкент, 2013. - №2. - С. 12-16. 14.00.13. (14.00.00.
№13).
8. Касымова Г. Г. Влияние фармакотерапии ДЭНА-индуцированного
гепатоканцерогенеза на уровень цитокинов //Вестник Ташкентской
медицинской академии – Ташкент, 2013. - №2. - С. 18-20. 14.00.13. (14.00.00.
№13).
9. Касымова Г. Г. Иммуномодуляторы в коррекции нарушений иммун ной
и цитокиновой системы при гепатоканцерогенезе // Журнал проблемы
биологии и медицины. - 2013. - №2(73). - С. 82-84. (14.00.00. №16).
10. Касымова Г. Г. Влияние ронколейкина на показатели оксида азота и
перекисное окисление липидов при гепатоканцерогенезе //Журнал
теоретической и клинической медицины. – Ташкент, 2013. - №3. - С. 24-27.
14.00.03(14.00.00. №3).
11. Каримов Х. Я., Касымова Г. Г. Влияние ронколейкина на содержание
цитокинов сыворотки крови крыс с экспериментальном лейкемией //
52
Медицинский журнал Узбекистана. – Ташкент, 2014. - №1. - С.102-105.
14.00.08. (14.00.00. №8).
12. Касымова Г.Г., Очилова Д.Т., Камилова Ш.Х. Сравнительная
характеристика уровня цитокинов при гепатоканцерогенезе и лейкемиях //
Вестник Ташкентской медицинской академии. – Ташкент, 2015.№4.-С. 26-29.
(14.00.00. №13).
13. Kasymova G.G. Peroxidation of lipids and activity of enzymes of antioxi
dant protection in microsomal fraction of the liver and kidneys of rats with leucosis
// European Science Review. - Austria, Vena, 2016. - № 3-4.P.120-122. (14.00.00;
№19).
14. Kasymova G.G. Effect of combined pharmacotherapy lipid peroxidation
and activity of enzymes antioxidant protection in rat livergepatocancerogeneze //
European Science Review. - Austria, Vena, № 3-4. 2016. - P.110-112. (14.00.00;
№19).
II бўлим (II часть; IIpart)
15. Каримов Х.Я., Касымова Г. Г., ЗариббаевУ. З., Қурбонова Н. Н. Экс
периментальные модели хронических лейкозов: Методические рекоменда
ции. Ташкент, 2010. – 20 с.
16. Каримов Х.Я., Касымова Г. Г., Иноятова Ф. Х. Экспериментальное
обоснование применения ронколейкина в химотерапии лейкозов: Методиче
ские рекомендации. Ташкент, 2010. – 16 с.
17. Касымова Г.Г. Влияние лактофлора на активность НАДФН
диафоразы печени при ДЭНА-индуцированном канцерогенезе // Вестник Юж
но-Казахстанской медицинской академии.-2007. – Том 37, №4. - С. 17-19.
18. Kasymova Gulmira, Zaribbaev Ulugbek. Liver mitochondrial enzyme
system in the dynamics of experimental leukemia // European medical, health and
pharmaceutical journal. - 2012. - Vol.5. – Р. 1-4.
19. Kasymova G. G., Isroilov R. I. Effects of doxorubicin and roncoleukine
on liver morphology in diethylnitrosamine (DENA)-induced gepatocarcinogenesis
// European journal of natural history. - 2012. - Vol.6. - P. 4-6.
20. Касымова Г.Г., Янгибаев У. Экспериментальные модели хрониче ских
лейкозов // Современная диагностика, лечение заболеваний системы крови и
проблемы трансфузиологии: Сб. науч. трудов. - Ташкент, 2008. - С.72-73.
21. Касымова Г.Г. Гепатоканцерогенез кезинде. Денсаулык. - 2008.-
№3.-С 3-6.
22. Каримов Х. Я., Зариббаев У. З., Касымова Г. Г., Курбанова Н. Н. Осо
бенности течения хронических лейкозов у крыс, индуцированных бензолом //
1- Научно-практическая конференция. - Душанбе, 2009. - С. 135-137.
23. Karimov H. Ya., Kasymova G. G. Effect of roncoleukine on contents of
serum cytokines in rats with experimental leukemia // Journal of Eurasia October
2013. – Vol. 3, №1. - P. 82. IV. International Eurasia Hematology Congress. 2013.
53
24. Inoyatova F. Kh. Kasymova G. G., Zaribaev U. Z. Energy-productiong
and detoxication functions of liver in experimental leukemia // Journal of Eurasia
October 2013. Vol.3, №1.P.133. IV International Eurasia Hematology Congress.
09-13 october 2013.
25. Karimov H. Ya., Kasymova G. G. Effect of roncoleukine on serum cyto
kines in leukemic rats. X th International Symposium on the Chemistry of Natural
Compounds November 2013. Volume 142.
26. Inoyatova F. Kh., Kasymova G. G., Zaribaev U. Z.. Study of liver energy –
producing and detoxication functions in experimental leukemia. X th International
Symposium on the Chemistry of Natural Compounds November 2013. Volume
145.
54
Автореферат «Тошкент тиббиѐт академияси ахборотномаси» журнали
тахририятида тахрирдан ўтказилди
(20.06.2017 йил).
Босишга рухсат этилди: 03.07.2017 йил
Бичими 60х45
1
/
8
, «Times New Roman»
гарнитурада рақамли босма усулида босилди.
Шартли босма табоғи 3,5. Адади: 100. Буюртма: № 140.
Ўзбекистон Республикаси ИИВ Академияси,
100197, Тошкент, Интизор кўчаси, 68
«АКАДЕМИЯ НОШИРЛИК МАРКАЗИ»
Давлат унитар корхонасида чоп этилди.
55
