Diagnostic aspects of genetic techniques to the study of breast cancer

Биология ва тиббиёт муаммолари 2018, №4 (104) 215

УДК: 618.19-006:615.849.2:616-073.75

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ РАКА

МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

М.Т. ТУХТАБАЕВА, А.Н. АБДИХАКИМОВ, М.А. ГАФУР-АХУНОВ

Ташкентский областной филиал Республиканского специализированного научно-практического центра

онкологии и радиологии

КЎКРАК БЕЗИ ЎСМАСИ ГЕНЕТИК ТЕКШИРИШ УСУЛЛАРИНИНГ ТАШҲИСИЙ

ЖИҲАТЛАРИ

М.Т. ТУХТАБАЕВА, А.Н. АБДИХАКИМОВ, М.А. ГАФУР-АХУНОВ

Республика онкология ва радиология ихтисослаштирилган илмий-амалий маркази

Тошкент вилояти филиали

DIAGNOSTIC ASPECTS OF GENETIC TECHNIQUES TO THE STUDY OF BREAST CANCER

M.T. TUKHTABAEVA, A.N. ABDIHAKIMOV, M.A. GAFUR-AKHUNOV

Tashkent regional branch of the Republican specialized scientific and practical center of

Oncology and radiology

Рак молочной железы (РМЖ) является ча-

сто диагностируемым онкологическим заболева-

нием, который составляет 23% от всех первично

выявляемых случаев рака [19]. Наследственные

формы РМЖ зачастую ассоциированы с высоким

риском развития первичной множественности

злокачественных опухолей. Эти новообразования

характеризуются агрессивным течением, трудно-

стью прогноза исхода болезни и высокой смерт-

ностью.

К причинам быстрого роста заболеваемости

РМЖ на сегодняшний день относят глобальную

урбанизацию среды, старение населения, ухудше-

ние экологической ситуации, техногенные ката-

строфы. Все эти факторы ведут к наблюдаемому

за последнее десятилетие, неуклонному росту

числа онкологических заболеваний [4], включая

первичных множественных злокачественных опу-

холей (ПМЗО).

ПМЗО это независимое возникновение и

развитие у одного больного двух или более ново-

образований. При этом пораженными могут быть

не только разные, но и парные органы человека

[2].

ПМЗО может возникать в результате раз-

личных наследственных синдромов, которые яв-

ляются результатом специфических наследствен-

ных мутаций, предопределяющих риск развития

рака у 50% потомков, с поражением органов, ас-

социированных с этими синдромами. Одним из

самых распространенных онкологических заболе-

ваний у женщин является наследственный РМЖ,

частота которого составляет 5-10% [26].

Несмотря на то, что по темпам роста забо-

леваемости, РМЖ занимает лидирующее место

среди злокачественных новообразований, реаль-

ных тестов для раннего выявления РМЖ до сего-

дняшнего дня не существует [5].

Проблема своевременного выявления РМЖ

заключается не только в его бессимптомном раз-

витии, но и в отсутствие надёжных маркёров,

способствующих раннему выявлению неопласти-

ческого процесса. Установлено, что 80% больных

самостоятельно обнаруживают у себя данное за-

болевание [10].

Основными задачами онкогеномики явля-

ются изучение молекулярных механизмов канце-

рогенеза, разработка оптимальных методов диа-

гностики, мониторинга и профилактики онколо-

гических заболеваний

.

Одним из подходов к ре-

шению этой задачи является анализ эпигенетиче-

ских характеристик генома опухолей.

Целью настоящего обзора литературных

источников явилось изучение диагностических

аспектов генетических методов исследования,

генов-кандидатов семейства SFRP с точки зрения

их потенциального применения в качестве эпиге-

нетических маркеров РМЖ.

Исследователями в настоящее время разра-

ботан ряд методов, позволяющих выявлять ано-

мальное метилированные локусы в геноме опухо-

левой клетки. Анализ маркеров метилирования

является достаточно информативным параметром

генетической диагностики, мониторинга злокаче-

ственности новообразований.

Выраженная гетерогенность на клиниче-

ском, тканевом и молекулярном уровнях привела

к созданию разных маркеров заболевания, кото-

рые не всегда обеспечивают эффективность диа-

гностики. Это объясняет необходимость разра-

ботки более современных мультигенных панелей

маркеров, в том числе и панелей маркеров мети-

лирования. Современные исследования указыва-

ют на принципиальную возможность использова-

ния, как панелей маркеров, так и единичных мар-

керов метилирования в качестве прогностических

и предиктивных при РМЖ.

Использование оптимального метода скри-

нинга дифференциального метилирования гено-

мов в исследованиях РМЖ привело к выявлению

целого ряда новых методов, которые изучаются

как с точки зрения участия в процессах канцеро-

Диагностические аспекты генетических методов исследования рака молочной железы

216 2018, №4 (104) Проблемы биологии и медицины

генеза, гак и с точки зрения диагностических

приложений. Разработка и внедрение более со-

временных методов скрининга дифференциально-

го метилирования и характеристики новых марке-

ров аномального метилирования должны повы-

сить эффективность создания систем диагности-

ческих маркеров РМЖ.

Известно, что РМЖ имеет мультифактор-

ную природу. Большинство женщин с диагности-

рованным РМЖ имеют спорадическое происхож-

дение, а не унаследованную форму онкологии.

Доля наследственного РМЖ составляет 10-15%

случаев рака яичника (РЯ) [2], что связано с при-

сутствием генетических мутаций в одном из двух

генов восприимчивости к РМЖ BRCA1 или

BRCA2 [34]. Следует отметить, что мутации дан-

ных генов на популяционном уровне встречаются

редко, ещё реже в спорадических формах этих

заболеваний [27]. Нужно подчеркнуть, что РМЖ

редко обусловлен другими наследственными син-

дромами [32].

В патогенезе РМЖ наряду с онкогенами не

менее важную роль играют и гены опухолевой

супрессии TSGs (Tumor Suppressor Genes) [21]. В

основе инактивации TSGs, селективного роста

злокачественно трансформированных клеток ле-

жат генетические изменения, включая точечные

мутации, делеции, перестройки, а также эпигене-

тические повреждения, влияющие на временной и

пространственный контроль экспрессии гена без

изменения в последовательности ДНК [4]. Эпиге-

нетические механизмы обратимого изменения

работы генома не затрагивают нуклеотидную по-

следовательность ДНК. К наиболее известным

эпигенетическим механизмам относится метили-

рование ДНК, посттрансляционная модификация

ядерных белков (гистонов) и посттранскрипцион-

ная регуляция стабильности матричных РНК -

мРНК [1]. Нарушения в функционировании эпи-

генетических механизмов контроля транскрипци-

онной активности генома играет важную роль в

процессе неопластической трансформации [16].

Под метилированием понимают обратимую

химическую модификацию структуры ДНК путем

присоединения метильной группы к цитозину в

составе CpG-динуклеотида, где пара цитозин-

гуанин последовательно располагаются в одной и

той же цепи ДНК [9].

Метилирование ДНК является одним из ос-

новных механизмов контроля экспрессии генов,

изменение структуры цитозина влияет на эффек-

тивность связывания транскрипционных факто-

ров с регуляторными участками ДНК. В процессе

неопластической трансформации часто наблюда-

ется гиперметилирование цитозина в составе

определенных локусов, это явление называется

глобальным гипометилированием или равномер-

ным снижением степени метилирования всего

генома. Глобальное снижение степени метилиро-

вания геномной ДНК сопутствует патологической

активации онкогенов и накоплению хромосомных

аберраций, в то время как, локальное гипермети-

лирование может сопровождаться угнетением ак-

тивности генов TSGs и геномной нестабильно-

стью [9].

Вышеуказанное доказывает, что диагности-

ческий потенциал аномального метилирования

может быть использован для определения про-

гностических критериев развития РМЖ.

Онкогенный сигнальный каскад реакций

Wnt служит для передачи сигнала с клеточной

поверхности в ядро, где происходит активация

транскрипционных программ, обеспечивающих

клеточную пролиферацию и устойчивость к

апоптозу [8]. Сигнальный путь Wnt играет крити-

чески важную роль в нормальном эмбриональном

развитии и нарушения в его тонкой регуляции

ассоциированы с множеством дефектов развития,

а также многими новообразованиями, включая

РМЖ [17].

Белки семейства Wnt обладают чертами,

присущими факторам роста и представляют собой

модифицированные гликопротеины молекуляр-

ной массой около 40 кДа [7].

Передача сигнала внутрь клетки по данному

сигнальному пути запускается путем формирова-

ния комплекса Wnt с соответствующим рецепто-

ром либо с группой рецепторов на поверхности

клетки. В настоящее время у человека идентифи-

цированы 19 белков [25], принадлежащих к се-

мейству Wnt, которые связываются с 15 рецепто-

рами Fzd (Frizzled) и LRP (Low density lipoprotein

Receptor-related Protein).

Исаева А.В. и соавт. [3] в результате своих

исследований доказали, что формируются так

называемые сигналосомы, отвечающие за стаби-

лизацию β-катенина (кофактора сигнального пу-

ти Wnt, задействованного в процессах дифферен-

цировки, апоптоза и пролиферации), затем накоп-

ленный β-катенин мигрирует в ядро и вступает во

взаимодействие с ДНК-связывающими белками

семейства Tcf/LEF, осуществляя взаимодействие

с различными ядерными факторами, контролиру-

ющими специфические транскрипционные мише-

ни. Нарушения в функционировании данного сиг-

нального каскада зависит от типа взаимодейству-

ющих с β-катенином белков [12] и является важ-

ным патогенетическим фактором при онкологи-

ческих.

Активирующие мутации сигнального пути

Wnt широко распространены в ряде опухолей.

Помимо мутаций нарушения передачи сигнала в

каскаде реакций происходят через изменения экс-

прессии ряда белков, гены которых были подвер-

жены эпигенетической трансформации. Татар-

ский В.В. [11], проводя доклинические исследо-

М.Т. Тухтабаева, А.Н. Абдихакимов, М.А. Гафур-Ахунов

Биология ва тиббиёт муаммолари 2018, №4 (104) 217

вания, показал, что ингибирование сигнального

пути Wnt приводит к терапевтическому эффекту в

ряде Wnt-зависимых опухолей. В норме метили-

рование CpG-островков регулирует экспрессию

генов. Механизм этого процесса заключается в

том, что промоторные (регуляторные) регионы

генов характеризуются накоплением большого

количества CpG-пар.

Одним из наиболее ранних и часто встре-

чающихся эпигенетических событий, наблюдае-

мых на начальных этапах развития опухолей раз-

личной локализации, является нарушение эпиге-

нетической регуляции активности генов, осно-

ванной на аномальном их метилирова-

нии/диметилировании как одного, так и обеих

аллелей, что позволяет дифференцировать опре-

деленные типы опухолей [30].

Эпигенетическая модификация регулятор-

ных участков генов нарушает их взаимодействие

с факторами транскрипции, блокируя эти участки

с помощью белков (Methyl CpG binding proteins),

специфично связывающихся с метилированными

CpG-парами и, кроме того, вносит изменения в

окружающий хроматин, переводя его в стабильно

репрессированное состояние [37]. Это явление

практически не наблюдается в нормальных тка-

нях, и получило название аномального метилиро-

вания генов в опухоли.

В отличие от мутаций, изменение профилей

метилирования ДНК, связанные с потерей экс-

прессии генов, происходят в определенном участ-

ке гена (промоторная область, первый экзон). На

сегодняшний день установлено, что метилирова-

ние генов ассоциировано с агрессивной формой

опухоли и прогрессией данного заболевания [22].

Поскольку аномальное метилирование яв-

ляется одним из наиболее ранних событий в ге-

номе трансформированной клетки, характер ме-

тилирования онко-ассоциированных генов спосо-

бен обеспечить возможность диагностирования

онкопатологии на самых ранних этапах ее воз-

никновения, т.е. задолго до клинических призна-

ков, что в свою очередь, позволит проводить ме-

ры своевременной превентивной терапии [22].

Таким образом, гены, подвергающиеся ме-

тилированию во время ранней фазы онкогенеза,

являются потенциальными маркерами ранней ди-

агностики рака. Гены, подвергающиеся метили-

рованию в процессе прогрессии малигнизации,

служат потенциальными прогностическими мар-

керами.

Эпигенетические изменения ДНК обнару-

живаются на начальных этапах канцерогенеза,

занимая важное место в развитии онкологической

патологии [31]. При злокачественных новообра-

зованиях раковые клетки метастазируют в смеж-

ные нормальные ткани через кровоток, путем

лимфокинеза или переносятся в полости тела. В

этом процессе белки, кодируемые генами TSGs,

участвуют в механизмах, регулирующих клеточ-

ный рост, повреждение ДНК, апоптоз и метабо-

лическую регуляцию [20].

Sherr C.J. [33] установил, что у пациентов с

онкологическими заболеваниями происходит

инактивация опухолевых супрессоров, а в по-

следнее десятилетие был идентифицирован ряд

классических TSGs, которые блокируются при

потере гетерозиготности либо путем физической

их делеции в геноме опухоли. В настоящее время

доказано, что аномальное метилирование ДНК

влияет на экспрессию TSGs на эпигенетическом

уровне. Потеря функций TSGs ведет к неустойчи-

вости генома, что увеличивает восприимчивость к

РМЖ [34].

В настоящее время доказано, что гиперме-

тилирование островков CpG является механизмом

инактивации TSGs раковых клеток [35].

Поскольку изменения профилей метилиро-

вания ДНК, в отличие от мутаций, связано с поте-

рей экспрессии генов, и, как правило, происходит

в определенном участке гена, это более часто

встречающееся событие, чем структурное изме-

нение генома [8]. Следует отметить, что аномаль-

ное метилирование регуляторных областей генов

характерно для опухолей и практически никогда

не встречается в нормальных тканях [38].

Белки Fz относятся к крупнейшему семей-

ству рецепторных белков, сопряженных с G-

белками (GPCR) [29] и являются рецепторами для

семейства секретируемых липогликопротеинов

Wnt [24]. Влияние Wnt/Fz-зависимой передачи

сигнала на пролиферацию клеток определяет ос-

новную функцию данного сигнального пути. Он

неоднократно используется в развивающемся ор-

ганизме, отвечая за раннее эмбриональное разви-

тие, а также за более поздние процессы органоге-

неза [23].

Во взрослом организме Wnt/Fz-зависимый

сигнальный каскад в основном не используется, а

некорректная активация данного каскада, напри-

мер, в результате соматических мутаций его ком-

понентов, ведет к неконтролируемому росту и

возникновению онкологии во многих типах тка-

ней, в том числе в молочной железе и яичниках

[14]. В настоящее время показано, что половина

случаев РМЖ связано с гиперактивацией Wnt-

зависимого сигнального пути [6].

Установлено, что к данному семейству при-

надлежат представители рецепторных белков

SFRP1-5 (secreted frizzled receptor protein). Эти

белки являются компонентом функционально

значимого онкогенного сигнального пути Wnt

[15], который вовлечен в процесс онтогенеза,

пролиферации, дифференциации, апоптоза эм-

бриогенных клеток и взрослых тканей.

Диагностические аспекты генетических методов исследования рака молочной железы

218 2018, №4 (104) Проблемы биологии и медицины

Рецепторные белки SFRP способны непо-

средственно связываться с Wnt, блокировать дан-

ный сигнальный путь. Было обнаружено, что свя-

зывание SFRP может приводить к отклонениям в

активации Wnt [18], нарушениям регуляторных

функций генов и переход их в TSGs [28].

Вместе с тем, гиперметилирование генов

белков семейства SFRP было обнаружено при

разных типах рака, в частности, при раке желудка

- гиперметилирование SFRP2 [36], SFRP5 [39];

раке кишечника - SFRP4; SFRP1, SFRP2, SFRP4;

при РЯ [13] и при РМЖ [8] SFRP2.

Таким образом, анализ литературных ис-

точников последних лет показал, что особую ак-

туальность и востребованность приобретают раз-

работка и использование в клинической практике

высокоинформативных прогностических и пре-

диктивных молекулярно-генетических онкомар-

керов с целью оценки рисков и возможности ран-

него диагностирования онкологических заболева-

ний, выбора стратегии лечения и его эффективно-

го контроля.

Литература:

1. Ванюшин Б.Ф. Эпигенетика сегодня и завтра //

Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2013.

- №17(4/2). – С.805-832.

2. Имянитов Е.Н., Хансон К.П. Молекулярная он-

кология: клинические аспекты. – Санкт-

Петербург, 2007. – 211 с.

3. Исаева А.В., Зима А.П., Шабалова И.П., Рязан-

цева Н.В., Васильева О.А., Касоян К.Т., Саприна

Т.В., Латыпова В.Н., Берёзкина И.С., Новицкий

В.В. β-Катенин: структура, функции и роль в опу-

холевой трансформации эпителиальных клеток //

Вестник РАМН. – 2015. - №70(4). - С.475-483.

4. Казубская Т.П., Ходырев Д.С., Пронина И.В.,

Ермилова В.Д., Паяниди Ю.Г., Чхиквадзе Н.В.,

Сельчук В.Ю., Брага Э.А., Логинов В.И. Метили-

рование генов-супрессоров в эпителиальных опу-

холях молочной железы и яичников, включая

первично-множественные // Российский биотера-

певтический журнал. – 2012. - Том 11. - №1. -

С.69-74.

5. Казубская Т.П., Логинов В.И., Ходырев Д.С.,

Ермилова В.Д., Паяниди Ю.Г., Чхиквадзе Н.В.,

Сельчук В.Ю., Брага Э.А. Метилирование генов

RASSF1A, RARβ2, SEMA3B в эпителиальных

опухолях молочной железы, яичников и при по-

линеоплазии // Опухоли женской репродуктивной

системы. - 2012. - №1. - С.61-68.

6. Катанаев В.Л. Внутриклеточная передача сиг-

нала от Wnt-лигандов и сопряженных с G-

белками frizzled рецепторов // Биохимия. – 2010. -

Том 75. - Выпуск 12. - С.1642-1650.

7. Куликова К.В., Кибардин А.В., Гнучев Н.В.,

Георгиев Г.П., Ларин С.С. Значение сигнального

пути Wnt для развития меланомы // СТМ. - 2012. -

№3. - С.107-112.

8. Москалев Е.,А., Бубнов В.В., Лебедев И.Н. Ме-

тилирование отдельных CpG-динуклеотидов в

генах сигнального пути Wnt как потенциальный

эпигенетический маркер злокачественных ново-

образований молочной железы // Медицинская

генетика. – 2016. - №5. - С.18-23.

9. Самсонов Р.Б., Раджабова З.А., Чебуркин Ю.В.,

Клюге В.А., Ткаченко Е.В., Малек А.В. Эпигене-

тические механизмы регуляции генной экспрес-

сии в развитии плоскоклеточного рака головы и

шеи: терапевтические перспективы // Опухоли

головы и шеи. – 2016. – Выпуск 4. – Том 6. - С.35-

44.

10. Тамкович С.Н., Войцицкий В.Е., Лактионов

П.П. Современные методы диагностики рака мо-

лочной железы // Биомедицинская химия. – 2014.

- Том 60. - Выпуск 2. - С.141-160.

11. Татарский В.В. Сигнальный путь Wnt: пер-

спективы фармакологического регулирования //

Успехи молекулярной онкологии. – 2016. – Вы-

пуск 1. – Том 3. - С.28-31.

12. Чуйкин И.А., Лянгузова М.С., Поспелов В.А.

Сигнальные пути, определяющие пролифератив-

ную активность эмбриональных стволовых клеток

// Цитология. – 2007. – Том 49. - №5. - С.370-384.

13. Al-Shabanah O.A., Hafez M.M., Hassan Z.K.,

Sayed-Ahmed M.M., Abozeed W.N., Alsheikh A.,

Al-Rejaie S.S. Methylation of SFRPs and APC genes

in ovarian cancer infected with high risk human pap-

illomavirus // Asian Pac J Cancer Prev. – 2014. -

N15(6). - N2719-2725.

14. Anitha P., Priyadarsini R.V., Kavitha K.,

Thiyagarajan P., Nagini S. Ellagic acid coordinately

attenuates Wnt/betacatenin and NF-kappaB signaling

pathways to induce intrinsic apoptosis in an animal

model of oral oncogenesis // Eur J Nutr. – 2013. -

N52. – P.75-84.

15. Chung M.T., Lai H.C., Sytwu H.K. SFRP1 and

SFRP2 suppress the transformation and invasion abil-

ities of cervical cancer cells through Wnt signal

pathway // Gynecol Oncol. - 2009. - N112. – P.646-

653.

16. Esteller M. Epigenetics in cancer // N Engl J Med.

– 2008. - N358(11). – P.1148-1159.

17. Gordon M.D., Nusse R. Wnt signaling: multiple

pathways, multiple receptors, and multiple transcrip-

tion factors // J Biol Chem. – 2006. – V.11. -

N281(32). – P.22429-22433.

18. Jacob F., Ukegjini K., Nixdorf S. Loss of secreted

frizzled-related protein 4 correlates with an aggres-

sive phenotype and predicts poor outcome in ovarian

cancer patients // PloS one. - 2012. - N7. – P.318-385.

19. Jemal A., Bray F., Center M.M., Ferlay J., Ward

E., Forman D. Global cancer statistics // CA Cancer J

Clin. – 2011. - N61. - P.69

‑

90.

М.Т. Тухтабаева, А.Н. Абдихакимов, М.А. Гафур-Ахунов

Биология ва тиббиёт муаммолари 2018, №4 (104) 219

20. Hanahan D., Weinberg R.A. Hallmarks of cancer:

the next generation // Cell. - 2011. - N144. – P.646-

674.

21. Yang J., Chen L., Kong X., Huang T., Cai Y.D.

Analysis of tumor suppressor genes based on gene

ontology and the KEGG pathway // PLoS One. –

2014. – V.10. - N9(9). – P.107-202.

22. Li Z., Guo X., Wu Y., Li S., Yan J., Peng L.,

Xiao Z., Wang S., Deng Z., Dai L., Yi W., Xia K.,

Tang L., Wang J. Methylation profiling of 48 candi-

date genes in tumor and matched normal tissues from

breast cancer patients // Breast Cancer Res Treat. –

2015. - N149(3). – P.767-779.

23. Logan C.Y., Nusse R. The Wnt signaling pathway

in development and disease // Annu Rev Cell Dev

Biol. – 2004. - N20. – P.781-810.

24. MacDonald B.T., Tamai K., He X. Wnt/beta-

catenin signaling: components, mechanisms and dis-

eases // Dev Cell. – 2009. - N17(1). – P.9-26.

25. MacDonald B.T., He X. Frizzled and LRP5/6 re-

ceptors for Wnt-сatenin signaling // Cold Spring Harb

Perspect Biol. – 2012. - N4(12). – P.78-80.

26. Nicoletto M.O., Donach M., De Nicolo A., Artioli

G., Banna G. BRCA-1 and BRCA-2 mutations as

prognostic factors in clinical practice and genetic

counseling // Cancer Treat Rev 2011. - N27. – P.295-

330.

27. Narod S.A., Foulkes W.D. BRCA1 and BRCA2:

1994 and beyond // Nat Rev Cancer. – 2004. - N9. –

P.665-676.

28. Ozdemir F., Altinisik J., Karateke A., Coksuer H.,

Buyru N. Methylation of tumor suppressor genes in

ovarian cancer // Exp Ther Med. - 2012. - N4. –

P.1092-1096.

29. Pierce KL, Premont RT, Lefkowitz RJ. Seven-

transmembrane receptors // Nat RevMol Cell Biol. –

2002. - N3(9). – P.639-650.

30. Pronina I.V., Loginov V.I., Burdennyy A.M.,

Fridman M.V., Kazubskaya T.P., Dmitriev A.A.,

Braga E.A. Expression and DNA methylation altera-

tions of seven cancer-associated 3p genes and their

predic ted regulator miRNAs (miR-129-2, miR-9-1)

in breast and ovarian cancers // Gene. – 2016. – V.15.

- N576(1Pt3). – P.483-491.

31. Skinner M.K., Manikkam M., Guerrero-Bosagna

C. Epigenetic trans generational actions of environ-

mental factors in disease etiology // Trends Endo-

crinol Metab. – 2010. - N21. – P.214-222.

32. Suh D.H., Kim M., Lee K.H., Eom K.Y., Kjeld-

sen M.K., Mirza M.R., Kim J.W. Major clinical re-

search advances in gynecologic cancer in 2017 // J

Gynecol Oncol. – 2018. - N29(2). – P.31.

33. Sherr C.J. Principles of tumor suppression // Cell.

– 2004. - N116. – P.235-246.

34. Scully R., Livingston D.M. In search of the tu-

mour-suppressor functions of BRCA1 and BRCA2 //

Nature. - 2000. - N408. – P.429-243.

35. Smith I.M., Mithani S.K., Mydlarz W.K., Chang

S.S., Califano J.A. Inactivation of the tumor suppres-

sor genes causing the hereditary syndromes predis-

posing to head and neck cancer via promoter hyper-

methylation in sporadic head and neck cancers //

ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. – 2010. - N72. –

P.44-50.

36. Shin H., Kim J.H., Lee Y.S., Lee Y.C. Change in

gene expression profiles of secreted frizzled-

related proteins (SFRPs) by sodium butyrate in gas-

tric cancers: induction of promoter demethylation and

histone modification causing inhibition of Wnt sig-

naling // Int J Oncol. – 2012. - N40. – P.1533-1542.

37. Tang W, Wang C, Fu F, Chen Q. RhoBTB2 gene

in breast cancer is silenced bypromoter methylation //

Int J Mol Med. - 2014. - N33(3). – P.722-728.

38. van Hoesel A.Q., Sato Y., Elashoff D.A. Assess-

ment of DNA methylation status in early stages of

breast cancer development // Br J Cancer. – 2013. -

N108(10). – P.2033-2203.

39. Zhao C., Ma H., Bu X., Wang W., Zhang N.

SFRP5 inhibits gastric epithelial cell migration in-

duced by macrophage derived Wnt5a // Carcinogene-

sis. - 2013. - N34. – P.146-152.