АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН
ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ
ИМЕНИ АКАДЕМИКА А.С. САДЫКОВА
На правах рукописи
УДК 577.1+547.94+547.915+543.867
ИШИМОВ УЧКУН ЖОМУРАДОВИЧ
КАПСАИЦИНОИДЫ CAPSICUM ANNUUM L., СОЗДАНИЕ НА ИХ
ОСНОВЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ПРОТИВОВОСПАЛИ-
ТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ
02.00.10 – Биоорганическая химия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата химических наук
Ташкент – 2011
2
Работа выполнена в лаборатории химии белков и пептидов Института
биоорганической химии имени академика А.С.Садыкова АН РУз
Научный руководитель:
кандидат химических наук,
старший научный сотрудник
Зиявитдинов Жамолитдин
Фазлитдинович
Официальные оппоненты:
доктор химических наук, профессор
Арипова Салимахон Фазиловна
доктор
фармацевтических
наук,
профессор
Камилов Хожиасрор Махсудович
Ведущая организация:
Национальный университет Узбекистана
имени Мирзо Улугбека, химический
факультет
Защита состоится “ ” 2012 г. в “ ” часов
на заседании
Специализированного совета Д.015.21.01 при Институте биоорганической
химии имени академика А.С.Садыкова АН РУз по адресу: 100125, Ташкент,
ул. Мирзо Улугбек, 83. Тел: (0099871) 2623540; Факс: (0099871) 2627063
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биоорга-
нической химии имени академика А.С.Садыкова АН РУз.
Автореферат разослан “ ” 20__ г.
Ученый секретарь
Специализированного Совета
кандидат химических наук
М.Б. Гафуров
3
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ
Актуальность проблемы.
Среди разнообразных органических соединений рас-
тительного происхождения алкалоиды занимают несколько «привилегированное» по-
ложение. Это объясняется их интересными химическими и структурными особенностя-
ми, а также исключительно важной практической ценностью в медицине и в сельском
хозяйстве.
Растения рода
Capsicum annuum
являются богатыми источниками капсаицинои-
дов (КО) – алкалоидов, обладающих высокой биологической активностью и схожей хи-
мической структурой. Отвары и настойки из плодов стручкового перца издавна приме-
няются в народной медицине при лечении заболеваний опорно - двигательного аппарата
(ЗОДА), которые являются одним и из основных причин инвалидности населения и на-
ходится, по данным ВОЗ, на 4 месте по распространенности. Препараты, полученные из
некоторых его видов, применяются в медицинской практике. Многие виды растений
этого рода, произрастающие на территории Узбекистана, остаются до сих пор мало изу-
ченными.
С развитием инструментальных методов выделения, установления структуры и
стандартизации биологически активных соединений из растительных объектов в каче-
стве субстанций лекарственных средств, увеличивается спрос на
очищенные экстракци-
онные препараты. Глубокая очистка повышает их стабильность, устраняет побочное
действие ряда балластных веществ. В связи с этим выделение, установление структуры
биологически активных соединений и их стандартизация в качестве субстанций лекар-
ственных средств, а также разработка лекарственных форм представляется актуальным
и целесообразным.
Степень изученности проблемы.
Данной проблеме посвящен ряд работ отече-
ственных и зарубежных исследователей, в которых проведены исследования по разра-
ботке методов выделения капсаицина (К), установлению структуры КО и конструиро-
ванию лекарственных препаратов на их основе. Однако, широкие исследования по соз-
данию композиционных лекарственных форм, содержащих в себе большое количество
нестероидных противовоспалительных соединений, не проводились. Исходя из выше-
описанного, создание комбинированных противовоспалительных препаратов на основе
нестероидных веществ из местного растительного и животного сырья, представляет
важное научное и практическое значение.
Связь диссертационной работы с тематическими планами НИР.
Диссерта-
ционная работа выполнена в рамках прикладных исследовании по теме: ГНТП-15. № П-
15.30. «Создание масляной композиции, обладающей противовоспалительной активно-
стью» (2003-2005 гг.) и ГНТП-10. № А-10-073 “Разработка технологии получения ново-
го лекарственного препарата “Апикапсалвин”, обладающего противовоспалительным
действием” (2006 – 2008 гг.).
Цель исследования:
Исследование основных и минорных компонентов суммы
капсаициноидов (СКО) выделенных из местных сортов красного стручкового перца
Capsicum annuum L.
(
C.annuum L.
), изучение их биологических, а так же фармакологиче-
ских свойств и создание на их основе лекарственного препарата.
Задачи исследования:
4
1. Исследование качественного и количественного состава КО, каротиноидов и
витаминов в спиртовом экстракте стручкового перца
C.annuum L.
;
2. Исследование некоторых биологических свойств СКО;
3. Создание субстанции «Капсаициноиды» из СКО и разработка методов контро-
ля качества;
4. Разработка композиции лекарственной формы «Апикапсалвин» для наружного
применения состоящей из субстанции «Капсаициноиды», пчелиного яда, метилсалици-
лата и очищенного виноградного масла (ВМ) в качестве основы.
Объект и предмет исследования.
Объектом исследования является красный
стручковый перец
C.annuum L
. Предметом являются сумма капсаициноидов.
Методы исследования.
При проведении исследований использовали методы
биоорганической химии, фармакологии и фармакопеи.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Результаты исследований по разработке метода выделения СКО из красного стручко-
вого перца
C.annuum L
.
- Результаты исследований качественного и количественного состава КО, каротиноидов
и витаминов спиртового экстракта стручкового перца
C.annuum L
.
- Исследования по стандартизации СКО и создание субстанции «Капсаициноиды».
- Определение качественного и количественного состава жирных кислот и витаминов
ВМ, полученного из местных винных сортов косточек винограда.
- Создание лекарственной формы противовоспалительного препарата «Апикапсалвин».
Научная новизна.
Впервые:
- установлен качественный и количественный состав минорных и основных КО,
каротиноидов и витаминов красного стручкового перца
C.annuum L.,
выращенного в
климатических условиях Ферганской долины;
- обнаружен витамин В
6
в спиртовом экстракте красного стручкового перца
C.annuum L
., отсутствующий в составе сортов перца, выращиваемых в других регионах;
- в процессе стандартизации ВМ, взятого в качестве основы для линимента, уста-
новлен качественный и количественный состав жирных кислот и витаминов;
Научная и практическая значимость результатов исследования.
Сочетание
инструментальных методов для характеристики, изучения строения и стандартизации
компонентов природного сырья с подбором состава композиции не только по фармако-
логическим свойствам, но и синергизму действия может послужить методологическим
приемом конструирования эффективных лекарственных средств. Полученные результа-
ты по изучению КО, каротиноидного и витаминного состава и биологических свойств
СКО из красного перца местного сорта позволили создать импортозамещающий, экс-
портоориентированный новый противовоспалительный препарат «Апикапсалвин»,
применяемый при ЗОДА.
Реализация результатов
. Созданы ВФС для субстанции «Капсаици-
ноиды», ВФС для лекарственной формы - линимента «Апикапсалвин», кото-
рые зарегистрированы в ГУККЛС и МТ МЗ РУз под № 42 Уз –1470 – 2009 и
42 Уз –1471 – 2009. Решением МЗ РУз препарат и его субстанция разрешен к
широкому применению в медицине.
5
Апробация работы.
Основные результаты работы обсуждались на конферен-
циях «Ўзбекистонда табиий бирикмалар кимёсининг ривожи ва келажаги» (Тошкент,
2007), «50 years anniversary S. Yunusov Institute of the Chemistry of plant Substances 7
th
Inter-
national Symposium on the Chemistry of Natural Compounds» (Tashkent, 2007), «Актуаль-
ные проблемы химии природных соединений» (Ташкент, 2009), «Фармацияда таълим,
фан ва ишлаб чиқаришнинг долзарб масалалари» (Тошкент, 2009), «Актуальные проб-
лемы развития Биоорганической химии» (Ташкент, 2010), «Конференция молодых уче-
ных, посвященной памяти акад. С.Ю. Юнусова» (Ташкент, 2011).
Препарат «Апикапсалвин» рекламирован на II, III и IV Республиканских ярмар-
ках, «Инновационных идей, технологий и проектов».
Опубликованность результатов.
По теме диссертации опубликованы 3 статьи и
7 тезисов научных докладов.
Структура и объем диссертации.
Диссертация работа изложена на 139 страни-
цах компьютерного текста и состоит из введения, литературного обзора, полученные ре-
зультаты и их обсуждения, экспериментальной части, выводов и списка использованной
литературы включающего 222 источника и 8 приложения, содержит 18 рисунков, 38
таблиц и 4 схемы.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ
Во введении обоснована актуальность проблемы, сформулированы цель и задачи,
показана научная новизна и практическая значимость работы.
В обзоре литературы проанализированы данные о разновидности и распростра-
нении красного стручкового перца. Приведен химический состав, пути биологического
и химического синтеза, способы выделения и идентификации КО, биологические свой-
ства и область применения.
В главе «полученные результаты и их обсуждении» приведены данные по разра-
ботке метода выделения СКО, исследованию качественного и количественного состава
основных и минорных КО, витаминов и каротиноидов плоды стручкового перца
C.annuum L.,
выращенных в климатических условиях Ферганской долины. Обсуждены
условия препаративного выделения и разработка технологической схемы СКО, а также
создание и внедрение в практику субстанции «Капсаициноиды» и лекарственной формы
противовоспалительного препарата «Апикапсалвин».
В экспериментальной части описаны использованные приборы, реактивы, мате-
риалы и методы.
Полученные результаты и их обсуждение
1. Разработка метода выделения суммы капсаициноидов
Объектом исследования являлись плоды стручкового перца
C.annuum L.,
выра-
щенные в климатических условиях Ферганской долины (Коканд). Выделение СКО про-
водили из зрелых и высушенных плодов путем экстракции действующих компонентов
перца этиловым спиртом (вариант 1) и петролейным эфиром (вариант 2) в соотношении
1/10 при комнатной температуре в течение трех суток (со сменой растворителя через 24
часа). Ярко-красные экстракты упаривали на роторном испарителе. Выход олеосмолы в
варианте 1 составил 8,4 г, а в варианте 2 – 6,1 г. Выделение СКО из олеосмолы в вариан-
те 1 включало в себя 3 основных стадии: экстракция, распределение в системе органиче-
6
ских растворителей и колоночная адсорбционная хроматография на Al
2
O
3
. В варианте 2
отсутствовала стадия распределения в двухфазной системе растворителей, тем не менее,
выход составил на 30% ниже.
Для выяснения причин низкого выхода конечного продукта в случае варианта 2
необходимо было провести анализ количественного содержания капсаициноидов, вита-
минов и каротиноидов в олеосмолах 1 и 2. Для этой цели проводили анализы образцов с
помощью ВЭЖХ в присутствии соответствующих маркеров – коммерческих препара-
тов фирмы “Sigma”.
2. Определение количества капсаициноидов в олеосмолах
Для определения содержание основных КО в олеосмолах 1 и 2 отбирали образцы
по 100 мкг и растворяли в 1 мл этилового спирта. Количественный анализ проводили
методом ВЭЖХ. Профили элюции и условия анализа приведены на рис.1. В качестве
стандартов использовали К и дигидрокапсаицин (ДК) фирмы Sigma.
Рис.
1
. ВЭЖХ анализ олеосмолы 1 (А) и 2 (Б) для количественного определения КО. Ко-
лонка 4,6 х 250 мм Zorbax Eclipse XDB-C
18
5µm. Раствор А: 0,1% CF
3
СOOH, В:CH
3
CN.
Градиент концентрации %B/мин: 5/0-5; 70/35-40; 5/45. Скорость потока 1мл/мин, погло-
щение 269 нм. Внесено по 50 мкл раствора олеосмол (5 мкг). 1- нор-ДК, 2- К, 3- ДК.
Как видно из рисунка 1(А) на хроматограмме олеосмолы 1 присутствуют 53 пика.
Основной вклад в процентное содержание экстракта вносят пики, элюированные в про-
межутке времени от 34 до 44 минут. В отличие от хроматограммы (А), в хроматограмме
олеосмолы 2 (Б) присутствуют 28 пиков. Среди них пики элюированные на 35,1; 35,6 и
37,5 минутах, соответствуют времени удерживания стандартных образцов нордигидро-
капсаицина (нор-ДК), К и ДК. Полученные данные представлены в таблице 1.
Таблица 1
Состав и общее содержание капсаициноидов в олеосмолах полученных из 100 г перца
Препарат
Количество
густого
экстракта
Содержание капсаициноидов в 1 г экстракта
Общее
количесво
капсаици-
ноидов
Капсаицин
Дигидро-
капсаицин
Нордигидро-
капсаицин
Сумма
г
%
мг
%
мг
%
мг
%
мг
мг
%
Олеосмола 1
8,4
8,4
22,89
2,3
15,84
1,6
1,73
0,17
40,46
339,8
0,34
Олеосмола 2
6,1
6,1
20,99
2,1
15,24
1,5
1,40
0,14
37,63
229,5
0,23
Как видно из таб. 1, из 100 г красного стручкового перца
C.annuum L
. при экс-
тракции этиловым спиртом получено 8,4 г олеосмолы с общим содержанием КО 339,8
7
мг, выход которого составил 0,34% на сухой вес исходного материала. В случае экс-
тракции петролейным эфиром это значение составляло 229,5 мг (0,23%).
2. Определение минорных компонентов суммы капсаициноидов
Индивидуальные КО выделяли методом ВЭЖХ из СКО, на колонке 4,6х250 мм
ZORBAX 300SB-C
18
. Обнаружение и идентификацию КО проводили методом LC-MC
на приборе
Waters ZQ – 4000 непосредственным введением индивидуальных веществ в
масс-спектрометр в следующих условиях: источник ионизации ESI
+
; поток осушающего
газа 450 л/ч; температура осушающего газа 250°C; напряжение на конусе скиммера 30,
35, 50, 70 В; диапазон масс 100 – 400 m/z; способ ионизации положительный; мобильная
фаза вода – метанол (1:9); скорость потока 0,25 мл/мин. Для получения масс-спектров
при разных напряжениях конуса каждый образец повторно вводили в инжектор масс-
спектрометра. При напряжениях на конусе 35 и 50V молекулярные массы алкалоидов
отмечаются пиками молекулярного иона. В масс-спектрах также присутствовали пики 6
однозарядных и одного двухзарядного положительных ионов.
В таблице 2 представлены
m/z
и интенсивность (I, %) сигналов, образованных при
распаде К в приведенных выше условиях масс-спектрометрического анализа.
Таблица 2
Данные масс-спектра капсаицина и время удерживания при ВЭЖХ анализе
Ион m/z 106,6 121,6 122,6 136,6 152,7 169,7
181,7 М
+
305,9 Вр.удержив.
I, %
2,5% 23%
2%
100% 2,9% 5,71% 8,57%
14,3%
37,025 мин
В масс–спектре (таб.2), обнаружен сигнал для положительного иона 3-метокси 4-
оксибензилидена с
m/z
136.6 (100%) и сигналы вторичных положительных ионов с
m/z
106.6 (2,5%), 121.6 (23%) и 122.6 (2%). Так же обнаружены положительные ацильный и
ациламидные ионы, образованные при распаде молекулярного иона: С
9
Н
17
-ĊO-, С
9
Н
17
-
CO-ŃH- и С
9
Н
17
-CO-NH-ĊH
2
- с
m/z
152,7 (2,9%), 169,7 (5,71%) и 181,7 (8,57%) соответ-
ственно, на основании которых можно установить структурную формулу капсаицина и
возможные пути распада молекулярного иона капсаицина (схема 1).
Схема 1. Масс-спектрометрический распад капсаицина.
В масс-спектрах выделенных 11 индивидуальных веществ обнаружены сигналы
положительного иона 3-метокси 4-оксибензилидена с
m/z
136,6 (100%) и вторичных по-
ложительных ионов с
m/z
106,6 , 121,6 и 122,6 разной интенсивности, образованные из
ароматической части, а также сигналы положительных ацильных и ациламидных ионов,
образованных после распада алифатической части молекулярного иона: R-ĊO-, R-CO-
ŃH- и R-CO-NH-ĊH
2
-. В таблице 3 представлены
m/z
и интенсивности (I, %) сигналов,
8
образованных при распаде алифатической части молекулярных ионов КО в аналогич-
ных условиях масс-спектрометрического анализа и время удерживания при ВЭЖХ.
Таблица 3
Данные масс-спектрометрического анализа КО и время удерживания в
колонке при ВЭЖХ по сравнению с Капсаицином
Время удер-
живания.
Молекуляр-
ный ион (М
+
)
Вторичные ионы
мин
∆
t
m/z
и (I, %)
m/z
и (I, %)
∆
m/z
30,931 -6,09 277,8 (14,81) 136,6 (100) 124,5 (11,12) 141,5 (14,81) 153,6 (9,26)
-28
33,087 -3,94 279,9 (13,88) 136,6 (100) 126,9 (44,4) 143,9 (83,33) 155,5 (55,56)
-26
35,508 -1,52
291,7 (12,24) 136,6 (100) 138,7 (20,37) 155,7 (37,03) 167,7 (7,41)
-14
36,108 -0,92
293,9 (11,12) 136,6 (100) 140,7 (5,55)
157,7 (7,41)
169,6 (7,62)
-12
36,479 -0,55
293,9 (12,96) 136,6 (100) 140,6 (2,6)
157,7 (3,70)
169,6 (7,41)
-12
37,025
0
305,9 (14,3)
136,6 (100) 152,7 (2,9)
169,7 (5,71)
181,7 (8,57)
0
39,347 +2,3
307,9 (18,5)
136,6 (100) 154,6 (4,12)
171,6 (7,41) 183,6 (11,11)
+2
39,850 +2,83 319,8 (10,01) 136,6 (100) 166,2 (2,3)
183,2 (4,35)
195,2 (6,08)
+14
40,051 +3,03 319,9 (9,89)
136,6 (100) 166,3 (2,9)
183,3 (4,53)
195,3 (6,14)
+14
42,064 +5,04 321,9 (11,85) 136,6 (100) 168,7 (2,8)
185,7 (5,56)
197,7 (8,14)
+16
42,604 +5,58 322,0 (12,24) 136,6 (100) 168,7 (2,71)
185,7 (5,46)
197,7 (8,22)
+16
Увеличение
m/z
на 2 а.е.м., которые означает наличие 2 дополнительных водо-
родных атома ациламидной части КО приводит к увеличению времени удерживания его
в колонке от 2,0 до 2,3 мин по отношению к ненасыщенной молекуле. Увеличение или
уменьшение длины ациламидной части КО на одну метиленовую группу приводит к
изменению времени удерживания его в колонке на 2,85 мин., тогда как уменьшение на
две метиленовые группы уменьшает это время на 6,09 мин. Изменение места разветвле-
ния также приводит к уменьшению времени удерживания в колонке от 0,4 до 0,5 мин по
отношению времени удерживания изомера.
Таблица 4
Химическое строение капсаициноидов стручкового перца
C.annuum L
.
№
R - радикал
Тривиальное название
Содержание
в %
Время выхода
(мин)
1
Trans
-(CH
2
)
4
CH=CHCHMе
2
Капсаицин
45,29
37,025
2
(CH
2
)
6
CHMе
2
Дигидрокапсаицин
38,35
39,347
3
(CH
2
)
5
CHMе
2
Нордигидрокапсаицин
1,91
36,479
4
(CH
2
)
7
CHMе
2
Гомодигидрокапсаицин
1,56
42,604
5
trans
-(CH
2
)
5
CH=CHCHMе
2
Гомокапсаицин
1,31
40,051
6
trans
-(CH
2
)
3
CH=CHCHMе
2
Норкапсаицин
1,26
35,508
7
trans
-(CH
2
)
2
CH=CHCHMе
2
Норноркапсаицин
0,267
30,931
8
trans
-(CH
2
)
4
CH=CHCH
2
CHMе
2
Гомокапсаицин II
0,158
39,850
9
(CH
2
)
6
CHMeCH
2
Me
Гомодигидрокапсаицин II
0,148
42,064
10 (CH
2
)
6
Me
-
0,146
33,087
11 (CH
2
)
4
CHMeCH
2
Me
Нордигидрокапсаицин II
0,140
36,108
9
На основании полученных результатов в таблице 4 приведены формулы радика-
лов и общепринятые тривиальные названия идентифицированных капсаициноидов в
порядке уменьшения общего содержания в анализируемом сорте перца.
Таким образом, нами впервые определен качественный и количественный состав
минорных компонентов СКО, выделенных из плодов красного стручкового перца
C.annuum L
.
3. Определение витаминного состава в олеосмолах красного стручкового перца
Витамины в олеосмолах определяли методом ВЭЖХ. Условия анализа и профи-
ли элюции водорастворимых и жирорастворимых витаминов приведены на рис 2 и 3.
Полученные результаты приведены в таблице 5.
Рис.2. ВЭЖХ анализ водорастворимых ви-
таминов в олеосмолах 1 и 2. Колонка Zorbax
SB-C
18
, 3,5
m (4,6х75мм). Буфер А: 0.05 М
раствор KH
2
PO
4
pH 2,5; В:CH
3
CN. Про-
грамма градиента - 0,6% В 0-0,5 мин; 6% В
4мин; 30% В 12 мин, 60% В 16 мин. Ско-
рость потока 1 мл/мин, поглощение 204 нм,
Стандарты витаминов: 1.Аскорбиновая ки-
слота (С), 2. Тиамин (В
1
), 3. Никотинамид
(РР), 4. Пиридоксин (В
6
). 5. Пиридоксиа-
мин, 6. Аминобензильная кислота, 7. Пан-
тотеновая кислота, 8. Фолиевая кислота, 9.
Рибофлавин (В
2
), 10. Тиотиновая кислота.
Рис.3. ВЭЖХ- анализ жирорастворимых ви-
таминов в олеосмолах 1 и 2.
Колонка Zorbax
Eclipse XDB-C
18
, 3,5
m (4,6 х 75 мм). Рас-
твор А: Вода; В:CH
3
CN. Программа гради-
ента - 90% В 0-15 мин; 100% В 17,5 мин.
Скорость потока 1мл/мин, поглощение 210
нм, чувствительность 0,16 ОЕ.
Стандарты: 1.Ретинол (А), 2. Холекалцифе-
рол (D
3
), 3. Токоферол (Е).
Таблица 5
Витаминный состав олеосмол (мг/100 г перца)
№
Витамины
Олеосмола 1
Олеосмола 2
Лит. данные
1 Аскорбиновая кислота (С)
54,42 ± 0,056
0,12 ± 0,006
64,14
2 Тиамин (В
1
)
0,23 ± 0,006
-
0,35
3 Пиридоксин (В
6
)
0,05 ± 0,003
-
-
4 Рибофлавин (В
2
)
0,45 ± 0,002
-
0,8
5 Ретинол (А)
0,023 ± 0,0015
0,032 ± 0,0013
0,035
6 Холекалциферол (D
3
)
-
0,008± 0,0011
0,007
7 Токоферол (Е).
-
0,005± 0,0008
0,005
10
В олеосмоле 1 содержание витамина С составляет 54,42 мг, тогда как в олеосмоле
2 его количества составляет 0,120 ± 0,006 мг, а по литературным данным составлял 64,14
мг на 100 г перца. Кроме того, в олеосмоле 1, нами обнаружен витамин В
6
в количестве
0,050
±
0,003
мг, который не обнаружен в олеосмоле 2 и ранее в стручковом перце. Из
жирорастворимых витаминов в олеосмоле 1 был обнаружен только витамин А в коли-
честве 0,023 мг на 100 г перца, а в олеосмоле 2 обнаружены витамины А, Д и Е в количе-
ствах, согласующихся с литературными данными.
Из результатов анализа видно, что при экстракции этиловым спиртом в основном
извлекаются водорастворимые витамины. Их общее содержание по отношению к полу-
ченной олеосмоле (8,4 г) составляет 0,66% (55,15 мг). В олеосмоле 2 (6,1 г) преобладают
жирорастворимые витамины и их общее содержание составляет 0,0074% (0,045 мг), а
витамин С обнаружен 453 раза меньше чем в олеосмоле 1. В олеосмоле 1 витамин А об-
наружен в 0,72 раза меньше, чем в олеосмоле 2.
Каротиноидный состав рода
Capsicum
резко отличается в зависимости от вида,
агросорта перца, климатических условий культивирования и варьирует в довольно ши-
роких пределах. Исходя из этого, интересно было изучить каротиноидный состав
C.annuum L
. культивированного в климатических условиях Узбекистана, а также в оле-
осмолах 1 и 2.
4. Изучение каротиноидного состава
Выделение каротиноидов красного перца проводили при полном отсутствии све-
та встряхиванием с ацетоном в присутствии 0,5 % ионола. После фильтрования, высу-
шивания и перерастворения в 75% водном
растворе ацетона экстракт и олеосмолы 1 и 2
анализировали методом
ВЭЖХ (рис.4).
Рис. 4. ВЭЖХ – анализ каротиноидов перца
C.annuum L
. Колонка Lichrosorb RP-18 10мкм,
200х4.6 мм, диодно-матричный детектор, длина волны 460 nm. Мобильная фаза ацетон:
вода. Градиент ацетона: 75% - 5 мин, 75-95% - 10 мин, 95% – 5 мин, 95-75% - 5 мин. Ско-
рость потока 0,8 мл/мин. Каратиноиды: 1 - Капсорубин, 2 - Капсантин, 3 - Зеаксантин, 4 -
-Криптоксантин, 5 -
-Каротин.
В выделенных экстрактах содержится 5 основных видов каротиноидов, количе-
ственная характеристика которых приведена в таблице 6.
Из полученных данных видно, что олеосмола 2 содержит в себе 10,609 мг/г каро-
тиноидов, тогда как эти значения в олеосмоле 1 примерно в 7 раз меньше и равняется
1,480 мг/г.
11
Биологические свойства для СКО выделенных из различных сортов стручкового
перца мало изучены, так как состав СКО варьирует в зависимости от сорта и климата
прорастания. Поэтому следующим этапом наших исследование явилось изучение неко-
торых биологических свойств СКО.
Таблица 6
Каротиноидный состав красного стручкового перца
C.annuum L.
№
Каротиноиды
Ацетоновый экстракт
Олеосмола 1
Олеосмола 2
мг/г
мг/г
мг/г
1
Капсорубин
0,191±0,007
0,092±0,010
0,115±0,020
2
Капсантин
13,374±0,150
1,005±0,200
8,525±0,100
3
Зеаксантин
0,299±0,063
0,095±0,006
0,168±0,005
4
-Криптоксантин
0,353±0,030
0,103±0,020
0,215±0,020
5
-Каротин
2,283±0,078
0,185±0,008
1,586±0,050
Сумма
16,600±0,328
1,480±0,244
10,609±0,439
6. Антирадикальная активность капсаициноидов
Для изучения антирадикальной активности (АРА) нами была использована мето-
дика, основанная на способности антиоксидантов восстанавливать молекулы 2,2-
дифенил-1-пикрилгидразила (ДФПГ). Данным методом изучена кинетика рекомбина-
ции препаратов со стабильным радикалом ДФПГ. Полученные результаты показывают
(рис. 5), что часть молекул ДФПГ восстанавливается в течение первых 5 мин. реакции, а
в дальнейшем реакция восстановления проходит с более медленной скоростью. В об-
щем, кинетика восстановления ДФПГ подчиняется двухэкспоненциальной кривой из-
менения.
Рис.5.
Изменение
относительного
значения
оптической плотности (D/D
0
)
спиртового раствора ДФПГ при
добавлении
различного
количества СКО. На графике
указаны весовые соотношения
ДФПГ
и
СКО
(мг/мг).
Температура 24
о
С.
Таким образом, исследованный препарат СКО проявляет АРА, причем эффек-
тивность АРА зависит от концентрации препарата.
7. Влияние суммы капсаициноидов на проводимость бислойных мембран
Для определения влияния СКО на проводимость плоских липидных мембран по
отношению к неорганическим ионам эксперименты были проведены с использованием
метода фиксации электрического потенциала. Оказалось, что введение СКО в цис-отсек
измерительной ячейки приводит к изменению проводимости липидных мембран по от-
ношению к ионам К
+
(рис. 6). Анализ результатов показывает, что проводимость мем-
браны увеличивается с увеличением концентрации СКО. При этом для 40 мкг наблюда-
лась область плато. Можно предположить, что этот факт связан с накоплением молекул
КО в приповерхностной области липидных мембран.
12
Увеличение проводимости мембраны при взаимодействии молекул КО с липидами яв-
ляется результатом образования дефектов в бислое, через которые могут диффундиро-
вать неорганические ионы К
+
. Канальные структуры исключены, поскольку отсутству-
ют дискретные скачки проводимости при добавлении исследуемого препарата.
Рис.6. Изменение проводимости мембра-
ны при добавлении препарата (концен-
трации указаны) при постоянном пере-
мешивании. Буфер: KCl 10 mM, Hepes 10
mM, pH 7.4.
8. Влияние суммы капсаициноидов на набухание изолированных мито-
хондрий печени крыс в присутствии субстратов окисления
Эксперименты по влиянию СКО на энергозависимое набухание митохондрий
проводили в присутствии субстратов окисления - глутамата и малата. Было показано,
что в диапазоне концентраций 3-90 мкг/мл СКО вызывают энергозависимое набухание
митохондрий (Рис. 7).
Рис.7. Концентрационная зависимость энергозависимого набухания митохондрий в при-
сутствии капсаициноидов. А (оригинал записи), Б – гистограммы скорости набухания
митохондрии А/А
0
, где А скорость набухания митохондрий в присутствии и (А
0
) отсут-
ствии КО (контроль). Содержание белка в митохондриях составляло 0,5мг белка/мл.
Следует отметить, что дозозависимого эффекта СКО нами обнаружено не бы-
ло. Так, внесение 3 мкг СКО вызывало увеличение проницаемости мембран на 58,3% по
отношению к контролю. Увеличение концентрации СКО до 30мкг вызывало более сла-
бый эффект, который составил 41,6%. Максимальное набухание в исследуемом диапа-
зоне концентрации было зарегистрировано при концентрации СКО 60 мкг/мл, что в 5,9
раз превысило контрольный уровень. Более высокая концентрация СКО – 90 мкг/мл,
также вызывала такое же резкое изменение скорости набухания (
6,0 раз) относительно
контроля. Набухание митохондрий в присутствии СКО свидетельствует о нарушении
баръерных свойств внутренних мембран митохондрий. Это может иметь место за счет
13
образования СКО дефектов в мембране и, следовательно, происходит их набухание за
счет проникновения молекул воды.
9. Изучение противовоспалительных свойств капсаициноидов на модели
каррагенинового отека
Противовоспалительные свойства КО были изучены на модели каррагенинового
отека (таб. 7). Опыты проводили на крысах. При этом противовоспалительный эффект
оценивали по уменьшению отека и выражали в процентах к контролю (этиловый спирт).
Таблица 7
Антиэкссудативная активность СКО на модели каррагенинового отека у крыс
Концентрация
мг/мл
Исход
Через 5 часов
Через 24 часа
см
3
%
см
3
А (%)
см
3
А (%)
Контроль
0,9
0,09
100
2,25
0,2
0
2,0
0,2
0
0,25
1,0
0,01
100
1,75
0,2
44,44
1,63
0,15 57,27
0,5
1,0
0,1
100
1,21
0,12
84,21
1,12
0,1
89,09
1
0,9
0,09
100
0,99
0,09
93,23
0,92
0,1
98,18
1,2
1,0
0,01
100
1,1
0,16
92,48
1,05
0,1
95,45
1,5
1,0
0,1
100
1,15
0,11
88,72
1,08
0,15 92,73
Под действием раствора СКО с концентрацией 0,25 мг/мл, через 5 часов отек
уменьшался на 44,44%, спустя 24 часа - на 57,27% по отношению к контролю. В этом
интервале времени влияние раствора СКО с концентрацией 0,5 мг/мл составило 84,21 и
89,09% соответственно. Максимальный эффект был получен под действием раствора с
концентрацией 1 мг/мл, и под его действием отек лапки уменьшился на 93,23 и 98,18%
соответственно. Применение СКО более высокой концентрации также способствовало
уменьшению отека лапки, вызванного каррагенином, но их эффект был наравне с рас-
твором, имеющей концентрацию 1 мг/мл.
Таким образом, полученные результаты свидетельствует о выраженном противо-
воспалительном действии капсаициноидов на модели каррагенинового отека.
На основе полученных результатов нами установлено, что СКО обладает антира-
дикальной, мембранотропной и противовоспалительной активностями. Поэтому, опира-
ясь на биологические свойства СКО, дальнейшей задачей наших исследований явилось
разработка препаративного метода выделения СКО, характеристика субстанции и соз-
дание лекарственного средства для наружного применения.
10. Разработка препаративного способа выделения суммы капсаициноидов
Нами разработан новый, усовершенствованный метод выделения СКО. На схеме
2 представлены этапы производства СКО из красного стручкового перца
C.annuum L.
При этом выход СКО составил 0,65±0,05%, а суммарный выход каротиноидов составил
1,58±0,04% по отношению к сухому весу исходного материала. Следует отметить, что в
результате использования сорбента Силохром 80С
18
вместо Al
2
O
3
выход СКО увеличил-
ся с 0,34% до 0,65% (в 1,9 раз). Для производства СКО из красного стручкового перца в
препаративных количествах разработана пилотная установка, состоящая из измельчите-
ля тканей; экстрактора, снабженного якорной мешалкой, фильтром, обогревательной
14
рубашкой; перегонной системы «Simax», колонки с сорбентом; роторного испарителя,
лиофильной сушки. Определен оптимальный размер помола перца (3-4 мм), гидромо-
дуля (1/10 - кг/кг) и время экстракции (24 часа с двукратной сменой растворителя через 3
и 8 часов с периодическим перемешиванием). При этом из сырья извлекается 92,36%
целевого продукта.
На пилотной установке из
зрелых и высушенных
плодов перца
C.annuum L.
наработаны 5 серий суб-
станции,
названной
«Капсаициноиды» кото-
рую в дальнейшем ис-
пользовали для создания
лекарственной
формы
противовоспалительного
препарата
наружного
применения.
11. Разработка метода стандартизации суммы капсаициноидов
Субстанция «Капсаициноиды» представляет собой лиофилизированный поро-
шок от светло - оранжевого до тёмно – оранжевого цвета, сильно горького вкуса со спе-
цифическим запахом перца, нерастворимый в воде и водных растворах солей. Раство-
рим в щелочах и 50% водных растворах этилового, метилового и пропилового спиртов.
рН водного извлечения составляет от 3,2 до 6,0
.
Потеря в массе при высушивании не
превышает 4%, зольность – не более 1.0%. Подлинность и количественное определение
проводили методом ВЭЖХ и по времени удерживания веществ в колонке определяли
НДК, К и ДК (см. таблицу 4). Метрологическая характеристика количественного
определения капсаициноидов приведена в таблице 8.
Рис.8. ВЭЖХ – анализ
субстанции «Капсаици-
ноиды». Колонка 4,6 х
250 мм Zorbax Eclipse
XDB-C
18
5µm. Раствор
А:
0,1%
CF
3
СOOH,
В:CH
3
CN. Градиент кон-
центрации %B/мин: 5/0-
5; 70/35-40; 5/45. Ско-
рость потока 1мл/мин,
поглощение 269 нм.
15
Как видно из таблицы 8, граничные значения доверительного интерва-
ла составляют 91,378 ± 0,348 при доверительной вероятности 95%. Таким об-
разом, установлено, что содержание капсаициноидов в субстанции варьирует
в пределах от 90% до 92%.
Таблица 8
Метрологическая характеристика количественного определения капсаици-
ноидов в 5-ти сериях субстанции «Капсаициноиды»
№ серии
Содержание СКО, %
Метрологическая характеристика
01. 02.08.2007
91,32
f=4 S
x
=0,125 S=0,280
Х
ср
=91,378 ∆Х=0,348
∆Х
ср
=0,155 ε=0,8497%
ε
ср
=0,38% Р=95%
02. 10.09.2007
91,83
03. 11.10.2007
91,37
04. 15.11.2007
92,31
05. 20.12.2007
91,06
Образцы 5 серий субстанции, проект ВФС и пояснительная записка с обоснова-
нием всех статей проекта были переданы в ГУККЛС и МТ МЗ РУз и после рассмотре-
ния ВФС зарегистрирована под № 42 Уз – 1470 – 2009.
12. Разработка противовоспалительного препарата на основе субстанции
«Капсаициноиды»
В качестве основы для многих препаратов может служить масло из косточек ви-
нограда (Oleum Vitis viniferae) (ВМ). ВМ является одним из ценных растительных масел,
оказывает положительное действие на регуляцию уровня холестерина, лечит воспали-
тельные процессы и благоприятно влияет на жировой обмен. Исходя из этих соображе-
ний, нами разработан метод получения ВМ из косточек винограда с целью использова-
ния его в качестве основы в создаваемом противовоспалительном препарате.
12.1. Получение масла из косточек винограда
Масло из косточек винограда
Vitis viniferae
получали по ТУ Уз 10-59-97 с некото-
рыми модификациями. Измельченные косточки винограда (0,20-0,25 мм) экстрагирова-
ли бензином (гидромодуль 3:1) в течение 18 часов (3 раза, двукратной сменой раствори-
теля) при температуре 60-65
0
С. После концентрирования мицеллы промывали 0,1 М
раствором NaOH, водой, высушивали с помощью МgSO
4
. Выход масла составил 10% от
исходной массы косточек.
Очистка ВМ методом промывки 0,1 М раствором NaOH улучшает ее техниче-
ские показатели по сравнению с ТУ Уз 10-59-97. Цвет масла от желто-зеленого изме-
нился на желтый. Кислотное число от «более 6» уменьшилась до «менее 5», массовая
доля не жировых примесей с 0,5% уменьшилась до 0,3%, а массовая доля не омыляемых
веществ составила 1% вместо 2%.
Для определения жирно-кислотного состава ВМ проводили его этерификацию с
помощью метанола в щелочных условиях.
Идентификацию полученных метиловых
эфиров жирных кислот осуществляли с помощью GC/MS на приборе “Hewlett Packard”
HP 5972 с HP–5 MS детектором. Полученные масс – спектрометрические данные
обра-
батывали по базам данных масс - спектров «Wiley 275».
В результате проведенных ис-
следований определены следующие жирные кислоты: миристиновая - 0,412%,
16
пальмитиновая - 0,386%, пальмитолеиновая - 0,377%; стеариновая - 6,867%;
олеиновая - 11,525%; линолевая - 79,697% и линоленовая - 0,736%.
Среди обнаруженных жирных кислот наблюдалось достоверное увеличение ли-
нолевой кислот на 7,7%-21%, не обнаружены арахидоновая и гадолеиновые кислоты,
содержание остальных жирных кислот находились в пределах литературных данных.
Результаты жирно-кислотного состава ВМ позволили провести ее стандартиза-
цию методом GC/MS по линолевой кислоты, содержание которого в ВМ колеблется в
пределах 80%.
Исследование витаминного состава виноградного масла проводили методом
ВЭЖХ. Профиль элюции и условия хроматографии приведены на рис. 9.
Рис.9. Анализ витаминов виноград-
ного масла.
Колонка Zorbax Eclipse
XDB-C
18
, 3,5
m (4,6х75 мм). Рас-
твор А: Вода. В:CH
3
CN. Изократи-
ческий режим - 95% CH
3
CN. Ско-
рость потока 1мл/мин, поглощение
при 210 нм. Витамины: 1.Ретинол,
2. Холекалциферол (D
3
), 3.
-
Токоферол (Е).
В результате проведенных экспериментов в составе 100 г ВМ обнаружен Ретинол
(витамин А) – 6,5 мг, Холекалциферол (витамин D
3
) – 7,0 мг,
– Токоферол (витамин Е)
– 12,5 мг.
С целью выяснения эффективности ВМ, в качестве основы создаваемого лекар-
ственного препарата, необходимо было изучить ее влияние на проницаемость капилля-
ров кожи. Эксперименты проводили по стандартной методике на кроликах – альбиносах
и белых беспородных мышах. Опыты показали, что проницаемость капилляров кожи у
кроликов, под влиянием ВМ повысилось на 62% (р>0,01) со сравнению с контролем, а у
мышей – на 35% (р>0,01). Из полученных результатов видно, что ВМ обладает свойст-
вом повышать проницаемость капилляров кожи и может обеспечить эффективное про-
никновение под кожу лекарственных средств.
12.2. Подбор оптимальных соотношений ингредиентов противовоспалительного
препарата и разработка лекарственной формы
Для создания нового отечественного препарата для лечения ЗОДА использовали
субстанцию «Капсаициноиды», пчелиный яд, метилсалицилат и ВМ. В целях изучения
синергизма приготовлены 13 композиций, состоящих из вышеперечисленных ингреди-
ентов как по отдельности (варианты 1-3), так и в различных композициях (варианты 4-
13). Исследование противовоспалительной активности приготовленных линиментов
проводили на модели острого экссудативного воспаления вызванного каррагенином. В
качестве контроля использовали линимент, приготовленный без действующих актив-
ных веществ. Составы композиции и их активность приведены в таблице 9.
В ходе проведенных исследование установлено, что наибольшим противовоспа-
лительным эффектом (77,78%) обладает образец, состоящий из 3 мг пчелиного яда, 1 г
17
КО, 8 г метилсалицилата и 6 г виноградного масла. Также показано синергетическое
действие компонентов композиции, которое выражается в повышении противовоспали-
тельного эффекта по сравнению с линиментами приготовленных только из пчелиного
яда (17,77% эффект), или метилсалицилата (21,11% эффект), или КО (23,88% эффект) в
виноградном масле. На основе полученных результатов разработана лекарственная
форма противовоспалительного препарата, наработаны и охарактеризованы 5 серии ле-
карственной формы препарата. Линимент назван «АПИКАПСАЛВИН».
Таблица 9
Подбор ингредиентного состава композиций
№
Состав композиции
Противовоспалительный
эффект
СКО
Пчелиный яд
Метилсалицилат
ВМ
г
мг
г
г
%
1
0
3
0
6
17,77
2
0
0
8
6
21,11
3
1
0
0
6
23,88
4
0,6
2
4
6
35,56
5
0,5
1
4
4
21,10
6
0,5
1
4
3
26,11
7
0,7
1,5
5
5
45,55
8
0,6
2
7
6
37,22
9
0,5
1
6
4
27,77
10
0,5
2
6
5
45,55
11
1
3
8
6
77,78
12
0,8
1
7
4
61,11
13
1
2
6
3
72,22
13. Разработка метода стандартизации лекарственной формы линимента
"Апикапсалвин"
Для разработки метода стандартизации препарата проводили исследование по
определению подлинности, рН водного раствора, микробиологической чистоты, опре-
деления качественного и количественного состава ингредиентов препарата.
Подлинность и количественное определение компонентов препарата, определяли
методом ВЭЖХ. Профиль элюции и условия разделения приведены на рисунке 10.
Рис.10. ВЭЖХ - анализ 0,1% раствора
Апикапсалвина в этиловом спирте.
Хроматограф DU PONT (США), ко-
лонка ZORBAX 300SB-C
18,
5 мкм,
(4,6х250мм)
.
Подвижная фаза: Раствор
А: 0,1% раствор ТФУК; Раствор В:
MeCN. Условия градиента концентра-
ции MeCN: 1) 5 мин. 5%; 2) 30 мин.
5%-60%; 3) 5 мин. 60%; 4) 5 мин.
60%-5%. Скорость потока 1 мл/мин,
детектирование при 269 нм.
18
Для определения подлинности препарата должны выявиться пики со временем
удерживания: 20,0 – 22,0 мин – сорбиновая кислота (1); 31,0 – 32,0 мин – метилсалици-
лат (2); 36,0 – 40,0 мин – КО (3-5).
Метрологическая характеристика количественного определения капсаициноидов
и метилсалицилата в препарате «Апикапсалвин» приведены в таблице 10.
Таблица 10
Метрологическая характеристика количественного определения капсаициноидов и ме-
тилсалицилата
№ СКО, % Метрологичес. хар-ка
Метилсалицилат,%
Метрологичес. хар-ка
1
0,99
f=4 S
x
=0,009
S=0,019 Х
ср
=0,978
∆Х=0,024 ∆Х
ср
=0,011
ε=5,46%
ε
ср
=2,442% Р=95%
8,0
f=4 S
x
=0,039
S=0,086 Х
ср
=7,938
∆Х=0,107 ∆Х
ср
=0,048
ε=3,01% ε
ср
=1,347%
Р=95%
2
0,97
7,88
3
0,98
7,84
4
1,00
7,92
5
0,95
8,05
Таким образом, граничные значения доверительных интервалов для капсаици-
ноидов и метилсалицилата составляют 0,978 ± 0,024% и 7,938 ± 0,107% соответственно,
с доверительной вероятностью 95%.
14. Исследование специфической фармакологической активности и токсичности
препарата «Апикапсалвин»
Доклиническое изучение фармако–токсикологии линимента «Апикапсалвин»
было проведено в Лаборатории фармакологии ИБОХ АН РУз м.н.с. Д.С.Казанцевой. В
качестве препарата сравнения использовали коммерческий препарат Апизартрон
(Esparma GmbH, Германия). В качестве контроля использовали линимент, приготовлен-
ный только из эмульгатора и спирта.
Противовоспалительное действие линимента «Апикапсалвин» исследовали по
стандартным методикам на каррагениновой, серотониновой и альбуминовой моделях на
крысах (таблице 11).
Таблица 11
Антиэкссудативная активность «Апикапсалвина» (n=7, M±m)
Препараты
Прирост объема конечностей, %
относительно исходного
Антиэкссудативная активность,
%
Серотонин Альбумин Каррагенин Серотонин Альбумин Каррагенин
Контроль
48±2,4
53±2,7
67±4,5
Апикапсалвин
40±2,2
31±2,0
14±1,8
24±1,4
46±2,6
81±4,8
Апизартрон
35±2,4
33±2,1
25±1,8
28±1,6
37±2,0
62±4,6
Следует отметить что линимент «Апикапсалвин» примерно на 20% превосхо-
дит антиэкссудативные действие Апизартрона.
Также проведены доклиническое исследование фармако–токсикологии лекарст-
венной формы линимента «Апикапсалвин». При этом изучено влияние на адъювант-
ный отек, анальгезирующие действие, на сосудистую проницаемость кожи, изучена ост-
рая токсичность, кумулятивные свойства, кожно-резорбтивное действия, аллергические
свойства, хроническая токсичность, проведены патоморфологические исследования, а
19
также проведено изучение «острой» токсичности и противовоспалительного действия
линимента в зависимости от срока хранения.
На основании полученных результатов доклинических исследований линимента
«Апикапсалвин» составлен доклинический фармако–токсикологических отчет, который
принят ГУККЛС и МТ МЗ РУз. На разработанную лекарственную форму препарата
«Апикапсалвин» на основании приказа №329 МЗ РУз от 30 октября 2009 года получено
разрешение для практического применения и ВФС зарегистрирована в ГУККЛС и МТ
МЗ РУз под № 42 Уз – 1471 – 2009.
ВЫВОДЫ
1.
Впервые методом ВЭЖХ изучен капсаициноидный, каротиноидный и витамин-
ный состав спиртового экстракта красного стручкового перца
Capsicum annuum L.,
куль-
тивированного в климатических условиях Ферганской долины (Коканд). Показано, что
содержание основных капсаициноидов в экстракте составляет 4,05%, а содержание ка-
ротиноидов достигает 0,14% от веса олеосмолы. В составе экстракта обнаружены вита-
мины С, В
1
, В
2
, В
6
, А, причем, наличие витамина В
6
установлено впервые.
2.
Впервые, методом ВЭЖХ, из суммы капсаициноидов выделены в индивидуаль-
ном состоянии 11 основных и минорных капсаициноидов. С использованием методов
масс-спектрометрии (LC-MS), установлено строение всех выделенных компонентов.
3.
Исследованы антирадикальные, мембранотропные и антиэкссудативные свойст-
ва суммы капсаициноидов. Установлено, что капсаициноиды эффективно перехваты-
вают свободные радикалы, образуют дефекты, как в искусственных мембранах, так и в
мембранах митохондрий и подавляют отек, вызванный каррагенином. Биологический
эффект во всех случаях усиливается с ростом концентрации капсаициноидов.
4.
Разработан препаративный метод, создана пилотная установка для выделения
суммы капсаициноидов из перца
Capsicum annuum L
. Выход продукта составил 0,63%
по отношению к сухому весу исходного материала.
5.
Методами хромато масс-спектрометрии (GC-MS) и ВЭЖХ изучен жирно-
кислотный и витаминный состав виноградного масла, извлеченного из косточек мест-
ных сортов винограда, которое использовалось в качестве основы при создании лекарст-
венной формы. Показано, что 79,7% жирных кислот составляет линоленовая кислота,
также определено присутствие витаминов А, D
3
и Е в различных соотношениях.
6.
На основе субстанции «Капсаициноиды», виноградного масла, пчелиного яда и
метилсалицилата разработан противовоспалительный препарат «Апикапсалвин». При-
казом МЗ РУз №329 от 30 октября 2009 года получено разрешение на широкое приме-
нение в медицинской практике препарата и его субстанции. ВФС зарегистрированы в
ГУККЛС и МТ МЗ РУз под № 42 Уз –1470 – 2009 и № 42 Уз –1471 – 2009.
20
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ
1. Зиявитдинов Ж.Ф., Ишимов У.Ж. Разработка метода стандартизации субстанции кап-
саициноидов выделенного из плодов красного стручкового перца
Capsicum annuum L.
// «Ўзбекистонда табиий бирикмалар кимёсининг ривожи ва келажаги» илмий
конференция материаллари. Тошкент, 27-28 апрель 2007. – С. 91-92.
2. Ishimov U.J., Ziyavitdinov J.F., Ruzmetova D.T. Standardization of drug form of antiphlogis-
tic preparate «APICAPSALVIN» // 50 years anniversary S. Yunusov Institute of the Chemi-
stry of plant Substances 7
th
International Symposium on the Chemistry of Natural Com-
pounds. Tashkent, 16-18 October 2007. – P. 259.
3. Зиявитдинов Ж.Ф., Ишимов У.Ж. Разработка метода стандартизации субстанции
Капсаициноидов выделенных из плодов красного стручкового перца
Capsicum an-
nuum L
. // Фармацевтический журнал. №1. 2009. – С. 29-33.
4. Зиявитдинов Ж.Ф., Сагдиев Н.Ж., Ишимов У.Ж., Aisa H.А.,
Yili A. Исследование ми-
норных компонентов субстанции капсаициноидов методом масс – спектрометрии //
Конференция Актуальные проблемы химии природных соединений. Ташкент, 18-19
марта 2009. – С. 156.
5. Зиявитдинов Ж.Ф., Ишимов У.Ж., Камалова Д.К., Солиев Т.С.
Изучение противовос-
палительной эффективности и переносимости препарата «АПИКАПСАЛВИН» //
Фармацияда таълим, фан ва ишлаб чиқаришнинг долзарб масалалари, илмий-амалий
анжуман материаллари. Тошкент, 2009. – С. 301.
6. Зиявитдинов Ж.Ф., Казанцева Д.С., Ишимов У.Ж. Виноградное масло, как основа но-
вых противовоспалительных средств для наружного применения // Фармацевтиче-
ский журнал. №1. 2010. – С. 59-62.
7. Ишимов У.Ж., Зиявитдинов Ж.Ф., Сагдиев Н.Ж. Исследование минорных компонен-
тов суммы капсаициноидов
Capsicum annuum L.
// Журнал Химия природных соеди-
нений. №6. 2010. – С. 854-855.
8. Ишимов У.Ж., Зиявитдинов Ж.Ф., Сагдиев Н.Ж. Минорные компоненты суммы кап-
саициноидов // Актуальные проблемы развития Биоорганической химии. Междуна-
родная научная конференция. Ташкент, 20-21 сентября 2010. – С. 63.
9. Ишимов У.Ж., Зиявитдинов Ж.Ф. Каротиноиды красного стручкового перца
Capsicum annuum L
. // Актуальные проблемы развития Биоорганической химии. Ме-
ждународная научная конференция. Ташкент, 20-21 сентября 2010. – С. 62.
10. Ишимов У.Ж., Сонькина С.Н., Зиявитдинов Ж.Ф., Салахутдинов Б.А. Влияние сум-
мы капсаициноидов на проводимость бислойных мембран // Конференции молодых
ученых, посвященной памяти акад. С.Ю. Юнусова. Ташкент, 17 марта 2011. – С. 55.
21
Кимё фанлари номзоди илмий даражасига талабгор Ишимов Учқун
Жомурадовичнинг 02.00.10 – Биоорганик кимё ихтисослиги бўйича “Capsicum
annuum L. капсаициноидлари ва улар асосида яллиғланишга қарши таъсирга эга
бўлган дори воситасини яратиш” мавзусидаги диссертацияси
РЕЗЮМЕСИ
Таянч
сўзлар:
Capsicum
annuum
L
.,
капсаицин,
капсаициноидлар,
дигидрокапсаицин,
каротиноидлар,
витаминлар,
ЮССХ,
LC-MS,
GC-MS,
идентификация, дори воситаси, стандартлаш, фармакология.
Тадқиқот объектлари:
Capsicum annuum L
. қизил қаламчасимон қалампир.
Ишнинг мақсади:
Маҳаллий
Capsicum annuum L.
қизил қаламчасимон
қалампирдан ажратилган капсаициноидлар суммасининг асосий ва минор
компонентларини аниқлаш, ажратилган сумманинг биологик ҳамда фармакологик
хусусиятларини ўрганиш ва улар асосида дори воситаси ишлаб чиқиш.
Тадқиқот услублари:
Тадқиқот жараёнида биоорганик кимё, фармакология,
фармако-пея усулларидан фойдаланилган.
Олинган натижалар ва уларнинг янгилиги:
Биринчи марта Фарғона водийси
иқлим шароитида етиштирилган
Capsicum annuum L
. қизил қаламчасимон қалампир
таркибидаги капсаициноидлар, каротиноидлар ва витаминлар таркиби ЮССХ усулида
ўрганилди.
Капсаициноидлар
суммасининг
антирадикал,
мембранатроп
ва
антиэкссудатив хусусиятлари ўрганилди.
Capsicum annuum L
. қалампирдан
капсаициноидлар суммасининг препаратив усулини ажратиб олиш учун пилот қурилма
ишлаб чиқилди. Биринчи марта
Capsicum annuum L
. қизил қаламчасимон қалампир
таркибидаги капсаициноидларни LC-MS усулида сифат ва миқдор таркиби ўрганилди.
Қизил қаламчасимон қалампир таркибида 11 капсаициноидларнинг турли хил
нисбатларда бўлиши аниқланди. Капсаициноидлар суммаси асосида субстанция ишлаб
чиқилди. Маҳаллий узум навларининг данакларидан ажратиб олинган узум ёғидаги ёғ
кислоталари ва витаминлар таркиби GC-MS ва ЮССХ усуллари ёрдамида ўрганилди.
Амалий аҳамияти:
“Капсаициноидлар”
субстанцияси, узум ёғи, асалари заҳари
ва метилсалицилат асосида яллиғланишга қарши “Апикапсалвин” препарати ишлаб
чиқилди. “Капсаициноидлар” субстанцияси ва “Апикапсалвин” линиментининг ВФМ
лари ЎзР ССВ ТТ ва ДВСНҚББ да 42 Уз –1470 – 2009 ва 42 Уз –1471 – 2009 рақамлари
билан рўйхатга олинди.
Татбиқ этиш даражаси ва иқтисодий самарадорлиги: “
Капсаициноидлар”
субстанцияси ва “Апикапсалвин” линименти ЎзР ССВ нинг 2009 йил 30 октябридаги
329 – сонли буйруғига асосан тиббиёт амалиётида кенг қўллашга рухсат берилган.
Қўлланиш соҳаси:
биоорганик кимё, фармацевтика ва тиббиёт.
22
РЕЗЮМЕ
диссертации Ишимова Учкуна Жамурадовича на тему «Капсаициноиды Capsicum
annuum L., создание на их основе лекарственного средства противовоспалительно-
го действия» на соискание ученой степени кандидата химических наук по специ-
альности 02.00.10 – Биоорганическая химия.
Ключевые слова: Capsicum annuum L.,
капсаицин, капсаициноиды, дигидрокап-
саицин, каротиноиды, витамины, ВЭЖХ, LC-MS, GC-MS, идентификация, лекарствен-
ные средства, стандартизация, фармакология.
Объекты исследования:
красный стручковый перец
C.annuum L.
Цель работы:
Исследование основных и минорных компонентов суммы кап-
саициноидов выделенных из местных сортов красного стручкового перца
Capsicum
annuum L.
, изучение их биологических, а так же фармакологических свойств и создание
на их основе лекарственного препарата.
Методы исследования:
При проведении исследований использовали методы
биоорганической химии, фармакологии и фармакопеи.
Полученные результаты и их новизна:
Впервые методом ВЭЖХ изучен кап-
саициноидный, каротиноидный и витаминный состав красного стручкового перца
C.annuum L
культивированного в климатических условиях Ферганской долины. Иссле-
дованы антирадикальный, мембранатропный и антиэкссудативные свойства суммы
капсаициноидов. Разработана пилотная установка, а также препаративный метод выде-
ления СКО из перцы
C.annuum L
. Впервые методом LC-MS изучен качественный и ко-
личественный состав капсаициноидов, выделенных из красного стручкового перца
C.annuum L.
Обнаружено присутствие 11 капсаициноидов в составе красного стручко-
вого перца в различных соотношениях. Разработана субстанция на основе суммы кап-
саициноидов. Методами GC-MS и ВЭЖХ изучен жирно-кислотный и витаминный со-
став виноградного масла выделенного из косточек местных сортов винограда.
Практическая значимость:
На основе субстанции «Капсаициноиды», вино-
градного масла, пчелиного яда и метилсалицилата разработан противовоспалительный
препарат «Апикапсалвин». ВФС для субстанции «Капсаициноиды» и линимента «Апи-
капсалвин» зарегистрированы в ГУККЛС и МТ МЗ РУз под № 42 Уз –1470 – 2009 и №
42 Уз –1471 – 2009 соответственно.
Степень внедрения и экономическая эффективность:
Для субстанции «Кап-
саициноиды» и линимента «Апикапсалвин» приказом МЗ РУз №329 от 30 октября 2009
года получено разрешение к широкому применению в медицинской практике.
Область применения:
биоорганическая химия, фармацевтика и медицина.
23
RESUME
Thesis of Ishimov Uchqun Jamuradovich on the scientific degree competition of the
doctor of philosophy in chemistry on specialty 02.00.10. – bioorganic chemistry, subject:
“Capsicum annuum L. capsaicinoids and creation on their base drug mean with
anti-inflammatory action”
Key words: Capsicum annuum L.,
capsaicin, capsaicinoids, dihydrocapsaicin, carotino-
ids, vitamins, HPLC, LC-MS, GC-MS, identification, drug means, standardization, pharmacol-
ogy.
Subjects of research:
red pepper
Capsicum annuum L.
Purpose of work:
Investigation of the basic and minor components of sum of capsaici-
noids which isolated from local red pepper
Capsicum annuum L.
sorts, study of their biological,
pharmacological properties and creation on their base medicinal preparate.
Methods of research:
During investigation bioorganic chemistry, pharmacology and
pharmacopea methods were used.
The results obtained and their novelty:
Capsaicinoid,
carotinoid and vitamin composi-
tion of the
Capsicum annuum L.
red pepper which cultivated in climatic conditions at the Ferga-
na valley was studied for the first time by method HPLC. Antiradical, membranetrope and anti-
exudative properties of the sum of capsaicinoids were investigated. A pilot instrument and pre-
parative method for isolation the sum of capsaicinoids from the
Capsicum annuum L.
red pepper
is created. Quantative and qualitative composition of capsaicinoids which were isolated from the
Capsicum annuum L.
red pepper were studied by LC-MS method for the first time. In the red
pepper 11 capsaicinoids at different quantities were revealed. On the base of the sum of capsaici-
noids substance is created. Fatty acid and vitamin composition of the grape oil which isolated
from the local grape seeds are studied by methods of GC-MS and HPLC.
Practical value:
On the base of the substance “Capsaicinoids”, grape oil, bee venom and
methylsalysilate an anti-inflammatory preparate “Apicapsalvin” is created. The temporary
pharmacological papers for the substance of “Capsaicinoids” and for the linimentum “Apicap-
salvin” were registered by the main office of the quality control medicinal drugs and medicinal
techniques of Ministry of Health, Republic of Uzbekistan (№ 42 Uz –1470 – 2009 and № 42 Uz
–1471 – 2009 respectively).
Degree of embed and economic effectivity:
The substance of “Capsaicinoids” and li-
nimentum of “Apicapsalvin” are ordered by the Ministry of Health, Republic of Uzbekistan
(№329 from 30 October, 2009) for widely using in medicinal practice.
Field of application:
bioorganic chemistry, pharmaceutics and medicine.
